[发明专利]等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法

权利要求书

1.一种等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)灵芝孢子粉的预处理；

(2)等离子体放电处理过程；

(3)处理后灵芝孢子粉中灵芝三萜释放量对比检测；

(4)处理后灵芝孢子粉中灵芝多糖释放量对比检测。

2.根据权利要求1所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述步骤(1)中灵芝孢子粉的预处理方法为：收集优良菌种的灵芝孢子，利用无菌水清洗；2000-5000rpm离心后，留取沉淀的灵芝孢子。

3.根据权利要求1所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中进行等离子体放电处理前，对步骤(1)所得的灵芝孢子进行分散处理。

4.根据权利要求3所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述分散处理具体方法为：将步骤(1)所得的灵芝孢子注入玻璃平皿表面，用灭菌后的玻璃涂棒在表面涂布均匀，保证玻璃平皿内液体厚度不超过1mm；超净台中完全风干后，用灭菌后的玻璃涂棒将玻璃平皿中表面不平的位置涂抹平整。

5.根据权利要求1所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述步骤(2)中等离子体放电处理过程的进行采用等离子体放电装置进行，具体方法为：采用低气压介质阻挡放电，处理时，将步骤(1)所得的灵芝孢子平铺于等离子体放电装置的无菌玻璃平皿中，置于反应腔室内，反应腔室通抽气泵抽气而保持2000pa以下的气压，同时控制通入放电气体作为击穿气体，放电电压为1.5-2kV，在200-600瓦功率范围条件下，处理5-10min。

6.根据权利要求5所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述放电气体具体为空气、氮气、氦气和氩气中的一种。

7.根据权利要求1所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述步骤(3)中灵芝三萜释放量对比检测过程具体采用高氯酸-香草醛法测定。

8.根据权利要求7所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述高氯酸-香草醛法测定灵芝孢子中灵芝三萜释放量对比检测的具体方法为：

(1)齐墩果酸测定应用液的配制：取齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得；

(2)标准曲线的制定：量取齐墩果酸对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL，分别置于具塞试管中，挥干，放冷，加入新配制的香草醛冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，摇匀，在65-75℃水浴中加热12-18分钟，立即置冰浴中冷却4-6分钟，取出，加入乙酸乙酯4mL，摇匀，以相应试剂为空白，依照紫外-可见分光光度法，在546nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线；

(3)供试品溶液的制备：取本品粉末0.01g，置具塞锥形瓶中，加乙醇2mL，超声处理25-35分钟，量取供试品溶液0.2mL，置具塞试管中，置于通风橱中，放冷，加入新配制的香草醛冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，摇匀，在65-75℃水浴中加热12-18分钟，立即置冰浴中冷却4-6分钟，取出，加入乙酸乙酯4mL，摇匀，以相应试剂为空白，依照紫外-可见分光光度法，在546nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中齐墩果酸的含量，根据上述制备的标准曲线计算，即得。

9.根据权利要求1所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述步骤(4)中灵芝多糖释放量对比检测过程具体采用硫酸-蒽酮法。

10.根据权利要求9所述的等离子体处理灵芝孢子以提高三萜和多糖释放量的方法，其特征在于，所述硫酸-蒽酮法测定灵芝孢子中灵芝多糖释放量对比检测的具体方法为：

(1)对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品，加水制成每1mL含0.12mg的溶液，即得；

(2)标准曲线的制备：量取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于具塞试管中，各加水至2.0mL，迅速加入硫酸蒽酮溶液6mL，立即摇匀，放置12-18分钟后，立即置冰浴中冷却12-18分钟，取出，以相应的试剂为空白，依照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

(3)供试品溶液的制备：取本品粉末0.01g，加水2mL，于离心管中静置0.8-1.2小时，75-85℃水浴加热2-4小时，待测；量取供试品溶液1.5mL，加水至2.0mL，迅速加入硫酸蒽酮溶液6mL，立即摇匀，放置12-18分钟后，立即置冰浴中冷却12-18分钟，取出，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在625nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读取供试品溶液中无水葡萄糖的含量，计算，即得。