[发明专利]一种原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法

权利要求书

1.一种原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法，其特征在于步骤如下：

1)新生犬脐带的采集：

在幼犬刚从母体生出时用无菌器械剥离胎衣，剪取脐带，立即将脐带放入含10％双抗溶液的PBS缓冲溶液中；

2)从脐带中分离出富含间充质干细胞的胶质组织：

剪开脐带被膜，暴露出中间的管状结构，剔去动脉和静脉，剩余不含血液的中空乳白色管即为所需的管状组织；

3)清洗和剪碎组织块：

将分离到的管状组织依次分别置于含10％、5％、1％双抗溶液的PBS缓冲溶液中浸泡5分钟，然后转移到烧杯中，用组织剪将其剪至1mm3大小；

4)胶原酶消化：

加入10倍体积的1％Ⅰ型胶原酶，置于37℃培养箱中消化12h以上；

5)扩增培养：

用脐带间充质干细胞培养液稀释后过200目筛网，1200rpm离心5分钟，弃上清，加脐带间充质干细胞培养液吹打均匀后转移至培养皿中，以5％CO2浓度、37℃环境于培养箱中培养，所述脐带间充质干细胞培养液由体积比为88％的人脐带间质干细胞完全培养基、10％的胎牛血清、1％的双抗溶液和1％的谷氨酰胺溶液组成。

2.根据权利要求1所述的原代培养犬脐带来源的间充质干细胞的方法，其特征在于，步骤5后还包括步骤：6)培养24h和72h后分别进行脐带间充质干细胞培养液换液，并根据间充质干细胞生长状况进行传代。