[发明专利]一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法，包括以下步骤：1）外植体的采集及预处理：将从野外采集回来的巴蜀报春幼苗进行修整，把不需要的部分去掉，取生长状况良好的叶片、叶柄、茎尖以及根做为外植体，自来水冲洗30min，用干净的滤纸将水分吸干；2）外植体的消毒：用10%NaClO消毒10min，期间搅拌，无菌水冲洗3‑4遍，将无菌水倒干净，备用；3）接种：用经过高温高压灭菌的镊子夹取将灭菌完的外植体接种到MS+0.6mg/L KT+0.1mg/L 2,4‑D+30g/L蔗糖+8g/L琼脂粉培养基上，培养于14h/d光照，温度22℃培养室中。本发明通过组织培养的方法对其进行繁殖，解决了巴蜀报春依靠其种子自然萌发来繁殖后代的方式效率很低的问题。

技术领域

本发明属于植物脱毒与组织培养快繁技术领域，具体地涉及一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法。

背景技术

巴蜀报春（Primula rupestris Pax et K. Hoffm）,是报春花科报春花属多年生草本植物。是一种重要的观赏花卉，其繁殖方式主要依靠种子繁殖，也可以用分株法进行繁殖。但其种子的寿命很短，发芽力丧失快，例如春天采收的种子在秋天播种，发芽率会下降一半，陈种子的发芽率更低，有的甚至不发芽。并且其种子很小，又是喜光发芽的种子，因此依靠其种子自然萌发来繁殖后代的方式效率很低。

近年来，虽然有文献对报春花的组织培养技术进行了研究，但目前为止，对巴蜀报春的相关研究还尚未报道，包括巴蜀报春的组织培养快繁技术。巴蜀报春目前仅在湖北省宜昌市有发现，其他地区未见有报道，而且对其研究的文献暂时也没有。由于其种子繁殖率低，现已被列入濒危保护物种。故我们希望可以通过组织培养的方式可以实现其快速繁殖的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法，以解决巴蜀报春依靠其种子自然萌发来繁殖后代的方式效率很低的问题。

本发明的目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法，其操作流程包括以下步骤：

1）外植体的采集及预处理：将从野外采集回来的巴蜀报春幼苗进行修整，把不需要的部分去掉，取生长状况良好的叶片、叶柄、茎尖以及根做为外植体，自来水冲洗30min，用干净的滤纸将水分吸干；

2）外植体的消毒：用10%NaClO消毒10min，期间搅拌，无菌水冲洗3-4遍，将无菌水倒干净，备用；

3）接种：用经过高温高压灭菌的镊子夹取将灭菌完的外植体接种到MS+0.6mg/LKT+0.1mg/L 2,4-D +30g/L蔗糖+8g/L琼脂粉培养基上，培养于14h/d光照，温度22℃培养室中。

上述的步骤1）采用野生巴蜀报春的茎尖为最佳外植体。

上述的步骤3）用经过高温高压灭菌的镊子夹取已经过灭菌处理的外植体。

上述的步骤3）培养基PH为5.8。

上述的步骤3）20Day后可以肉眼可见长出无菌苗。

本发明与现有技术相比具有明显的优点和优异效果。由以上技术方案可知，本发明通过组织培养的方法对其进行繁殖，以解决巴蜀报春依靠其种子自然萌发来繁殖后代的方式效率很低的问题，为对巴蜀报春的研究奠定基础，可以弥补这一物种在对报春花科的研究中的空缺，具有一定的经济效益和社会效益。

具体实施方式

以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。

一种诱导巴蜀报春无菌苗快速繁殖的方法，其操作流程包括以下步骤：