[发明专利]一种年青煤降解液综合效价检测方法

说明书

本发明公开了一种年青煤降解液综合效价检测方法，检测年青煤降解液对作物种子萌发和生长过程中多种代表性优选参数的影响，通过对比研究转化成一种综合生物效价来表征降解液对作物生长发育的整体调节作用；相对于化学分析法，该方法更直观、准确地检测年青煤降解液对植物生长发育的整体调节作用的大小，该方法稳定性好，适用性强，标准化程度高；同时易操作、时间短、成本低，适于大规模推广使用，填补了年青煤降解液活性检测方法的空白，为其产品的推广应用和产业化开发扫除一大障碍。

技术领域

本发明涉及一种年青煤降解液综合效价检测方法，尤其是涉一种评价年青煤降解液调节植物生长活性的综合效价的检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

研究人员在用氧化剂对褐煤、泥炭等年青煤进行氧化降解时，发现了一种无色透明的蒸馏液，其pH在2.0到2.6之间，呈弱酸性，将其称为年青煤降解液。初步研究发现该降解液在调节土壤酸碱度，提高种子发芽率，增强作物抗逆性（抗盐、抗旱），促进作物生长发育，增加作物产量等方面都具有极好的效果，可作为一种新型的多功能农作物调理剂。其制备方法及作为植物生长调节剂的应用已申请国家发明专利，并获得授权（申请号：201410006333.5）。目前，年青煤降解液作为一种作用显著的新型作物生长调节剂已进入商品化阶段，但其调节植物生理活性的评价方法一直是其推广应用和商品化的瓶颈。到现在为止还没有行之有效的针对该降解液活性的化学或生物的标准化检测方法出现。一方面，降解液含有大量小分子的酸性物质，极性极强，且性质近，难以使用常见的HPLC、GC等技术手段对其进行分离鉴定及定量分析；另一方面，对于一种新型的天然活性物质，即使实现了部分化学成分的定量分析，因其活性的物质基础不明，也难以确定哪些是活性物质，是否具有代表性，不同成分之间是否具有协同作用等。再者，以作物生长发育程度或产量作为检测指标的常规方法，因影响因素多、周期长、成本高，也不适于标准化方法的建立及推广应用，这些原因使年青煤降解液活性测定标准化方法的建立面临巨大挑战。

更进一步的研究发现，年青煤降解液上述诸多活性之间存在很大的关联性，即通过提高种子发芽率、调节发育过程、增强作物抗逆性（抗盐、抗旱）等作用从整体上促进作物生长发育，最终增加作物产量。但对于不同来源或不同稀释浓度的降解液样品，各种作用之间并不是完全的正相关，例如可能存在某一样品可以增加作物种子发芽率，却抑制胚根伸长及降低幼苗重量的情况，或者说整体活性相似的不同样品对植物不同生长参数的调节强度是不一致的，所以单一的活性指标难以准确地评价降解液的整体活性。

发明内容

针对以上问题，本发明建立了一套综合效价检测方法，即检测盐胁迫环境下年青煤降解液对作物种子萌发和生长过程中多种代表性优选参数的影响，通过对比研究转化为生物效价来表征降解液对作物生长发育的整体调节作用；相对于化学分析法，该方法可以更直观、准确地表征年青煤降解液调节植物生长的活性，在其生物检测方面取得突破，填补了年青煤降解液这一新型天然产物活性检测方法的空白。

本发明提供一种年青煤降解液综合效价检测方法，特别是一种生物检测的标准化方法，具体内容如下：

（1）取籽粒饱满的白菜种子用水漂洗，经10%NaClO消毒8-10min后用无菌蒸馏水冲洗6-8次，用蒸馏水或稀释一百倍的年青煤降解液将白菜种子浸泡5-6h进行致敏；

（2）取步骤（1）同批用蒸馏水浸泡致敏一致的白菜种子240粒，整齐摆放到3个直径为15cm的底部铺有1层滤纸的培养皿中，每皿80粒（即平行试验三次），各加入15mL含120mmol/L NaCl的Hoagland's培养液，记为蒸馏水组；

（3）另取步骤（1）同批用年青煤降解液浸泡致敏一致的白菜种子240粒，整齐摆放到3个直径为15cm的底部铺有1层滤纸的培养皿中，每皿80粒（即平行试验三次），各加入15mL含120mmol/L NaCl的Hoagland's培养液，记为降解液组；