[发明专利]一种户尘螨特异性IgE半定量检测试剂盒及其用途

权利要求书

1.一种户尘螨特异性IgE半定量检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包括检测荧光液以及用于户尘螨特异性IgE半定量检测的免疫层析试纸条；

其中，所述的检测荧光液是通过将表面带羧基的量子点纳米球分别与羊抗人sIgE、鼠抗兔IgG共价偶联，混合后制备得到；

其中，所述的免疫层析试纸条包括依次相连的样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及用于提供组装平台的位于下方的塑料底衬，所述硝酸纤维素膜上具有由户尘螨过敏原蛋白包被的检测线以及兔IgG包被的质控线，样品垫提供了待测样品加入的位置。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测荧光液按照以下方法制备得到：

(1)量子点与鼠抗兔IgG抗体偶联，制备校准量子点荧光抗体标记物：

A、取100μl量子点纳米球，分散于200μl的磷酸缓冲液中，10000rpm离心10min，小心弃上清后，然后加入200μL的磷酸缓冲液，均匀分散，得到量子点纳米球溶液；

B、称量EDC 1.9mg，用1mL磷酸缓冲液溶解，混匀，即得到10mM的EDC溶液；

C、取20μl的EDC溶液，加入200μl的量子点纳米球溶液中，混匀，室温，翻转孵育0.5h，得到活化后的量子点纳米球；

D、活化后的量子点纳米球，10000rpm离心10min，弃上清，然后加入200μl的10mM，pH8.0的硼酸缓冲液，超声分散均匀；

E、取鼠抗兔IgG抗体50μl，加入活化后的量子点纳米球溶液中，混匀，然后室温继续孵育1h；

F、取10w/w％的BSA溶液20μl，加入步骤E的纳米球溶液中，继续反应1h；

G、封闭后的量子点纳米球溶液，10000rpm离心10min，然后用PBST缓冲液离心洗涤三次，最后分散于100μl的含有1w/w％BSA的10mM，pH6.0的PBS缓冲液中，待用；

(2)量子点与羊抗人sIgE偶联，制备量子点-抗IgE荧光抗体标记物；

A、取100μl量子点纳米球，分散于200μl的10mM，pH6.0的磷酸缓冲液中，10000rpm离心10min，小心弃上清后，然后加入200μL的磷酸缓冲液，均匀分散，得到量子点纳米球溶液；

B、称量EDC 1.9mg，用1mL磷酸缓冲液溶解，混匀，即得到10mM的EDC溶液；

C、取20μl的EDC溶液，加入200μl的量子点纳米球溶液中，混匀，室温，翻转孵育0.5h，得到活化后的量子点纳米球；

D、活化后的量子点纳米球，10000rpm离心10min，弃上清，然后加入200μl的10mM，pH8.0的硼酸缓冲液，超声分散均匀；

E、取羊抗人sIgE抗体50μl，加入活化后的量子点纳米球溶液中，混匀，然后室温继续孵育1h；

F、取10w/w％的BSA溶液5μl，加入步骤E的纳米球溶液中，继续反应1h；

G、封闭后的量子点纳米球溶液，10000rpm离心10min，然后用PBST缓冲液离心洗涤三次，最后分散于100μl的含有1w/w％BSA的10mM，pH6.0的PBS缓冲液中，待用；

(3)将步骤(2)以及步骤(3)得到的分别与鼠抗兔IgG、羊抗人sIgE共价偶联的量子点纳米球溶液按照等体积混合均匀，即得。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的样品垫是采用样本垫处理液进行处理后得到，所述的处理液为含1.0w/w％BSA、0.25v/v％Tween-20、1w/w％蔗糖和0.1w/w％NaN₃的0.01M pH 8.0的硼酸钠缓冲液。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述样品垫的处理方法是先将样品垫浸泡于样品垫处理液中20-60min，取出于30-45℃干燥箱中干燥9-15h，即得。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括荧光稀释液、校准品以及校准品稀释液，所述的荧光稀释液为含有1w/w％BSA的10mM，pH6.0的PBS缓冲液，所述的校准品为人抗尘螨过敏蛋白特异性IgE，所述的校准品稀释液为10mM，pH6.0的PBS缓冲液。