[发明专利]金叶过路黄组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）消毒灭菌：选取金叶过路黄的当年生枝条，以顶端芽为起始芽截取第二个芽至第三个芽之间的无芽茎段为外植体，将外植体放在流水下反复冲洗1h~2h，加入适量的洗涤剂浸泡清洗3~4次，边浸泡边振荡，冲洗干净后移至超净工作台进行下一步的消毒处理：先用体积浓度75%酒精浸泡20s~25s，用无菌水反复冲洗振荡外植体至少3次，每次冲洗时间不少于5min；再转入质量浓度0.1% 的升汞消毒10min~15min，用无菌水反复冲洗干净后，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；

2）愈伤组织的诱导：将消毒灭菌好的金叶过路黄外植体横向切成0.2cm~0.4cm长的小段，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上培养获得愈伤组织；诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA（0.4~0.5）mg/L+ZT0.2mg/L＋2,4-D0.05mg/L＋蔗糖30mg/L＋琼脂7mg/L，pH 值5.6~5.8；

3）愈伤组织的分化培养：外观表现良好的愈伤组织切成2mm~3mm的小块，接入分化培养基中进行分化培养，在愈伤组织上萌发出一定数量的不定芽；分化培养基的配方为：MS+6-BA（0.4~0.5）mg/L+ZT0.3mg/L＋NAA0.1mg/L＋蔗糖30mg/L＋琼脂7mg/L，pH值5.8~6.0；

4）壮苗培养：将不定芽切接种于壮苗培养基上进行壮苗培养得到健壮、且色泽翠绿的无根幼苗；壮苗培养基的配方为，MS+6-BA（0.4~0.5）mg/L+ZT0.5mg/L＋NAA0.2mg/L＋蔗糖30mg/L＋琼脂7mg/L，pH值5.7~6.0；

5）生根培养 ：把健壮的金叶过路黄无根幼苗转移到生根培养基上培养每苗分化出4~6条根；所述生根培养基配方为：1/4MS+NAA（0.2~0.5）mg/L＋活性炭3g/L+蔗糖25mg/L＋琼脂7mg/L，pH值5.7~6.0；

6）金叶过路黄的炼苗及移栽 ：生根后的幼苗在温度20±2℃的温室内拧松瓶盖放置3d~5d进行炼苗然后再移栽。

2.根据权利要求1所述的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2）中的培养条件为：温度22±2℃、暗培养、培养地点为无菌培养室。

3.根据权利要求1所述的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤3）中的培养条件为：温度22±2℃、光照强度1500~2000lx、光照时间10~12h/d、培养地点为无菌培养室。

4.根据权利要求1所述的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤4）中的培养条件为：温度25±2℃、光照强度2000~2500lx、光照时间12~15h/d、培养地点无菌培养室。

5.根据权利要求1所述的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5）中的培养条件为：温度20±2℃、光照强度1500~2000lx、光照时间10~12h/d、培养地点无菌培养室。

6.根据权利要求1所述的金叶过路黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤6）中的移栽的栽培基质由园土、沙、泥炭按（1~2）:1:1的体积比混合制成，栽培基质须经过灭菌，充分混匀后使用，移栽后，将栽培基质浇透水，并喷施800倍~1000倍质量百分比50%~60%多菌灵药液，以后每隔两周喷施一次，连续3次，移栽初期要注意保持基质和空气的湿度，湿度保持在70%~80%，温度22±2℃，前期应用遮光率25%~50%的遮阳网进行遮阴10d~15d；全封闭管理5d~7d，在10d逐步通风，20d除去覆盖物。