[发明专利]中国人胰腺癌细胞系sipanc-187建立方法

说明书

本发明公开了一种中国人胰腺癌细胞系sipanc‑187建立方法，包括以下步骤：1.标本采集2.组织消化3.PDX裸鼠荷瘤4.成瘤细胞培养与传代。本发明有益的效果：本发明构建的中国人胰腺癌细胞系sipanc‑187生物学特征为胰腺导管腺癌，其成瘤性良好，具有一定的耐药性，可较好地应用胰腺癌肿瘤、化疗耐药机制研究及中国人胰腺癌相关基因谱系分析等。

技术领域

本发明涉及一种胰腺癌原代肿瘤细胞建系的方法，主要是一种中国人胰腺癌细胞系sipanc-187建立方法。

背景技术

胰腺导管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)是最常见的胰腺肿瘤，早期即发生转移，而症状不明显，发现时多数已是晚期，预后极差，确诊后五年生存率往往不足5％，被称为“癌中之王”^[1-3]，位于我国男性癌症患者死亡率的第六位^[4]。过去基础和临床研究中所用到的胰腺癌细胞系多来源于国外ATCC细胞库，比如Panc-1，Bxpc-3，Miapaca-2，ASPC-1等，其细胞系来源于白种人胰腺癌患者，对我国胰腺癌研究来讲，可能存在一定的种群结构、基因等水平差异。此外，由于胰腺癌本身乏血供^[5]、且多肿瘤相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts，CAF)富集的特性，传统的肿瘤原代细胞建系方法在胰腺癌中的应用受到极大的限制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种中国人胰腺癌细胞系sipanc-187建立方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种中国人胰腺癌细胞系sipanc-187建立方法，该方法包括如下步骤：

(1)、标本采集并制成组织块；

(2)、组织消化：将上述组织块用5mlPBS重悬，加入700ul灭菌水配置的IV型胶原酶，工作浓度1437u/ml；25ul的无菌CaCl₂溶液，工作浓度1M；25-30mgBSA粉末，摇床37℃，200转/分，孵育30分钟后，将上述组织悬液自摇床取出，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清，加入5ml裂红液冰上裂解5分钟，再次加10mlPBS洗涤，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清后使用1mlPBS重悬；

(3)、PDX模型建立：将上述细胞计数，计取1*10⁶个细胞，并取100ulPBS重悬稀释，接种5-6周大小裸鼠皮下，接种部位为腋下，荷瘤12-14天后皮下荷瘤模型成瘤；

(4)、组织处理：脱颈椎法处死裸鼠，安全通风柜内手术完整分离PDX肿瘤组织，立即浸入20ml完全培养基，完全培养基采用RPMI 1640配置，含终浓度10％FBS(v/v％)及青霉素/链霉素双抗各100mg/ml，安全通风柜内使用20mlPBS反复冲洗组织，洗净并去除肉眼可见血块及坏死组织，取直径1*1*1-1.5*1.5*1.5cm大小肿瘤，将其剪碎成为1mm³大小组织块；

(5)、组织消化：将上述小组织块用5mlPBS重悬，加入700ul灭菌水配置的IV型胶原酶，工作浓度1437u/ml；25ul的无菌CaCl₂溶液，工作浓度1M；25-30mgBSA粉末，摇床37℃，200转/分，孵育30分钟后，将上述组织悬液自摇床取出，70um级滤网过滤除去未消化组织块，将滤过的细胞悬液加10mlPBS洗涤后，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清，加入5ml裂红液冰上裂解5分钟，再次加10mlPBS洗涤，1500转/分4℃离心5分钟，弃去上清后使用1ml完全培养基重悬；