[发明专利]糖化血红蛋白的检测方法、层析试纸条及其组装方法

说明书

本发明公开了一种层析试纸条，应用于糖化血红蛋白检测。其中，所述层析试纸条包括：底板，所述底板的一端为用于承载样品的加样区，另一端为用于提供层析动力的吸引区；所述加样区和吸引区之间形成层析反应区；所述层析反应区内依次设置有接近加样区的第一测试线和接近吸引区的第二测试线；所述第一测试线包被糖化血红蛋白单克隆抗体；所述第二测试线包被血红蛋白单克隆抗体。该方法结合了免疫层析法和亲和层析色谱法的优点，可以通过结构简单的试纸条检测及计算糖化血红蛋白含量，既提高了传统层析法的灵敏度特异性，又结合了亲和层析色谱法的检测方法，操作简便。

技术领域

本发明涉及层析检测技术领域，尤其涉及一种糖化血红蛋白含量的检测方法、层析试纸条及其组装方法。

背景技术

近年来，糖化血红蛋白(HbA1c)在临床上开始渐渐被高度重视。糖化血红蛋白(HbA1c)是血红蛋白A组分的某些特殊分子部位和葡萄糖经过缓慢而不可逆的非酶促反应结合而形成的。因此，当血液中葡萄糖浓度较高时，人体形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。

HbA1c是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查项目，其不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，能够反映糖尿病患者2～3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。

1993年美国1型糖尿病控制及并发症实验(DCCT)和英国大规模的II型糖尿病控制与并发症关系研究(UKPDS)的研究中把HbA1c作为糖尿病控制的一个观察指标。1996年4月起在日本，HbA1c被纳入老年人保健法中糖尿病筛选的检查项目。2002年美国糖尿病协会(ADA)已将其作为监测糖尿病控制的金标准，对其应用也作了明确的规定：即所有糖尿病患者均应常规测定HbA1c。其初诊时测定结果为基线时的代谢状况，此后的测定值则作为糖尿病长期治疗控制中的一部分，这样在提高糖尿病诊断水平、血糖控制、慢性并发症的防治中具有十分重要的应用价值。目前通常认为检测HbA1c的临床意义有两点：1.在糖尿病的筛选普查中有早期提示的价值，可作为轻症、II型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。2.在糖尿病的治疗中，HbA1C是评价血糖控制好坏的重要标准。

虽然糖化血红蛋白具有以上的重大检验意义，但在临床上，只有30％左右的糖尿病患者能做到定期监测糖化血红蛋白。

对于糖尿病患者而言，良好的血糖控制是预防并发症的关键，而血糖监测在很大程度上取决于患者本人的认知和行动。由于大部分患者选择可靠性不高的日常监测手段，目前超过60％的II型糖尿病患者的糖化血红蛋白控制不理想。

糖化血红蛋白长期控制不稳定的影响是多方面的，它会改变红细胞对氧的亲和力，加速心脑血管并发症的形成；如果眼睛内的晶体被糖化，则会引发白内障。此外，它可引起肾小球基底膜增厚，诱发糖尿病肾病，并引起血脂和血粘度增高。糖化血红蛋白升高，是心肌梗死、脑卒中死亡的一个高危因素。在男性患者中，糖化血红蛋白每增加1％，死亡率的相对危险性增加24％，女性患者增加28％。一旦糖化血红蛋白超过7％，发生心脑血管疾病的危险性就增加50％以上。

测定糖化血红蛋白的方法根据检测的原理，基本上可分为基于GHb和Hb的电荷不同(如离子交换法、电泳法)和基于Hb上糖化基团的结构特点(如亲和层析方法、免疫法和酶法等)两类。其中，临床上广泛采用采用离子层析法，其具有精密度高、重复性好且操作简单的优点。但其价格较为昂贵，而且容易受到带电性相近的胎儿血红蛋白(HB-F)的干扰,可能在离子交换HPLC分析图上与HbA1c峰重叠。

手工微柱操作会受到人工因素影响,可能会洗脱不完全或过度洗脱并受外界环境温度的影响,而某些血红蛋白如HbF异常增加时,也会与糖化血红蛋白同时洗脱,从而使结果产生偏差。由于手工操作层析时间和微柱的质量不易控制,易产生操作技术误差,重复性欠佳。