[发明专利]狼疮抗凝物检测用试剂盒及狼疮抗凝物存在与否判断方法

说明书

本发明公开了狼疮抗凝物检测用试剂盒及通过该试剂盒判断待测样品中狼疮抗凝物存在与否的方法，包括第1凝固时间测定试剂，其包含凝血因子激活剂、大豆磷脂，CaCl₂和缓冲液；第2凝固时间测定试剂，其包含凝血因子激活剂、氢化磷脂，CaCl₂和缓冲液；本发明在第2凝固时间测定试剂中加入氢化磷脂，以氢化磷脂结合LA，特异性好，稳定性高；本发明的试剂盒在检测LA时，不需要配套其他公知的检测试剂，无需将第1凝固时间测定试剂/第2凝固时间测定试剂和健康正常血浆混合来进行阳性样本的判断，并且在样本测试前也无需进行样本处理，简化了检测流程。

技术领域

本发明涉及狼疮抗凝物检测技术领域，尤其涉及一种狼疮抗凝物检测用试剂盒，本发明还涉及判断待测血浆中狼疮抗凝物存在与否的方法。

背景技术

狼疮抗凝物质(lupus anticoagulation，LA)是一种针对带阴电荷磷脂的自身抗体，是抗磷脂抗体的一种，常见于系统性红斑狼疮等结缔组织性疾病患者。因其首先在红斑狼疮患者身上被研究，故命名为狼疮抗凝物质。现已发现它可存在于多种疾病中。狼疮抗凝物质的持续存在被认为是不明原因的习惯性流产、死胎、胎儿发育迟滞、动静脉栓塞、各种易栓性疾病以及某些自身免疫性疾病的危险信号。

LA可通过识别脂结合凝血酶原来影响凝血反应，阻断活化的凝血因子与凝血酶原作用，从而抑制纤维蛋白的形成，致使凝血时间延长，因此称之为抗凝血酶原抗体可能更为适宜，开展LA的实验检测对临床各科的疾病诊断具有很大的意义。

LA的检测包括筛查试验、混合试验和确认试验。由于LA的影响因素复杂，在筛查试验阶段，需要将凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原检测、稀释或改良后的Russell蛇毒时间（dRVVT或 MRVVT)、和Staclot-LA试验或白陶土凝固时间等结合使用，以避开各干扰因素，但是多种方法的组合导致操作过程繁琐。

混合试验是通过用健康正常血浆与待测血浆采用1∶1的比例混合，来观察延长的活化部分凝血活酶时间（APTT）是否被纠正。若待测血浆缺少1种或多种凝血因子，则混合后延长的APTT 将得到纠正；反之若待测血浆中存在LA等抗凝物质，则无法被纠正。

关于检测顺序，国际血栓形成与止血学会（ISTH）主张LA 筛查试验阳性时立刻进行混合试验，依据混合试验的结果来决定是否需要进一步做LA的确认试验。

LA的确认试验是分别以低浓度含凝脂的凝固时间测定试剂和高浓度含凝脂的凝固时间测定试剂来测定凝固时间，通过各试剂得到凝固时间的比值来确认待测样本中LA的存在。

授权公告号CN102650643B公开了一种“狼疮抗凝物检测用试剂盒及狼疮抗凝物存在与否判断方法”，包括（i）第1凝固时间测定试剂，其含选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸中的至少1种磷脂；及（ii）第2凝固时间测定试剂，其含选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸中的至少1种磷脂；其中第1凝固时间测定试剂和第2凝固时间测定试剂之中至少一方含碱金属盐，且所述第2凝固时间测定试剂含相比所述第1凝固时间测定试剂更低浓度的碱金属盐，或者，不含碱金属盐。

授权公告号CN102384979B公开了“狼疮抗凝物检测用试剂盒及其存在与否的判断方法”，包括第1凝固时间测定试剂，其含锰盐、磷脂、和选自鞣花酸、高岭土、硅藻土和氧化硅的用于在体外引起血液凝固的活化剂；第2凝固时间测定试剂，其含锰盐、磷脂、和选自鞣花酸、高岭土、硅藻土和氧化硅的用于在体外引起血液凝固的活化剂，其中，第2凝固时间测定试剂中的锰盐浓度比第1凝固时间测定试剂中的低、或第2凝固时间测定试剂不含锰盐；和第3凝固时间测定试剂，其含有钙盐。

上述两种LA检测用试剂盒比以往的试剂盒，更明确地区分LA阳性待测样品和LA阴性待测样品。但是，该试剂盒需要同时检测待测样本和健康正常样本来获得狼疮比率，增加了测试的工作量。

发明内容