[发明专利]一组氨基酸标志物在急性肾损伤诊断试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及疾病诊断试剂盒领域，具体是一组氨基酸标志物在制备急性肾损伤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述的氨基酸标志物选自犬尿氨酸，马尿酸和氧脯氨酸中的一种或两种以上。本发明提出的3个氨基酸标志物能够在急性肾损伤早期准确诊断疾病的发生，单独用于诊断急性肾损伤时AUC值均大于0.7，诊断区分效果较好。其中犬尿氨酸和马尿酸诊断能力优于临床常用肾功能标志物肌酐以及早期诊断标志物NGAL，上述3个氨基酸对AKI的诊断时间均早于临床肾功能标志物尿素氮。本发明提供的靶向氨基酸代谢组学检测方法能够同时实现多个氨基酸的定量分析，灵敏度高，结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及疾病诊断试剂盒领域，具体地说，是三种氨基酸标志物在急性肾损伤诊断试剂盒中的应用。

背景技术

急性肾损伤(AKI)是肾脏结构和功能受损的一种疾病状态，以突发和持续的肾功能下降为特征，是由不同病因导致的、涉及全身各系统症状的临床综合征。轻度的肾损伤可以在一段时间后自行恢复，即便AKI患者得到明显缓解，其长期心血管风险仍会增加。重度AKI患者损伤进展至肾衰竭时必须接受透析治疗。2013年我国约有290万住院患者罹患AKI，死亡率约24％。AKI的发生增加了住院患者医疗费用和死亡率，同时造成医疗资源的浪费。

改善全球肾脏病预后组织2012制定的临床实践指南(KDIGO指南)中以血肌酐和尿量为标准，将AKI定义为以下任一情况的发生，SCr 48小时内升高达≥0.3mg/dL(26.5μmol/L)；或Scr在7天内升高达基础值的≥1.5倍；或尿量＜0.5mL/kg/h持续6小时。肾小球滤过率的快速下降能够通过SCr升高和尿量减少反应，其诊断效果已得到广泛验证。然而，血肌酐水平变化较为迟缓，尿量对肾小球滤过率的评估受血容量影响较大，基于血肌酐和尿量的变化很难做到早期发现和准确评价肾损伤。研究表明急性肾损伤后肾脏的损伤是可以逆转的，早期的AKI诊断能够准确发现AKI患者使其得到及时的干预治疗，降低肾脏的损伤程度。发掘新的AKI早期预警标志物有助于解决目前AKI的诊断不足，使病人在疾病早期就能够被发现。

随着基因组学、蛋白组学和代谢组学的发展，AKI早期诊断标志物的发掘研究不断深入。目前发现的AKI早期预警标志物多为肾小管损伤时表达和分泌的特定蛋白，其中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)报道较多，在实验动物和临床病人中均表现出较好的诊断作用且时间早于传统标志物肌酐，但其检测方法较肌酐等小分子标志物更为复杂，多采用酶联免疫法进行检测。该方法灵敏度和特异性较高，但操作过程繁琐检测时间长，且基质中的代谢物可能与抗体出现交叉反应干扰测定结果。

肾脏参与体内多种氨基酸的代谢与排泄过程，体内氨基酸水平受到肾脏功能的调节，肾脏功能受到损伤时常发生氨基酸代谢紊乱。近年来研究发现，多种氨基酸水平与肾脏疾病患者的肾功能和预后显著相关，如非对称二甲基精氨酸、对称二甲基精氨酸、S-腺苷同型半胱氨酸等。由此可见，完整的肾功能在维持氨基酸循环水平中发挥重要作用，氨基酸作为代谢链终端的小分子代谢物可能成为AKI早期诊断的一个新的目标群体。应用靶向氨基酸代谢组学技术发掘有效的氨基酸标志物对于临床早期快速诊断急性肾损伤具有重要意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供3个可以用于诊断急性肾损伤的氨基酸标志物；本发明的第二目的在于提供一种能够同时定量所述氨基酸标志物的分析方法。上述目的是通过以下技术方案得以实现：一组用于诊断急性肾损伤的的血浆氨基酸标志物，包括犬尿氨酸，马尿酸和氧脯氨酸。一种定量分析所述氨基酸标志物的方法，通过高效液相色谱串联质谱技术对所述氨基酸标志物进行定量分析，该方法具有高通量和高灵敏度的特点能够满足生物样本中代谢物的定量检测。

本发明的第一方面，提供一组用于诊断急性肾损伤的血浆氨基酸标志物，包括犬尿氨酸，马尿酸和氧脯氨酸。

本发明的第二方面，提供一组氨基酸标志物在制备急性肾损伤诊断试剂或试剂盒中的应用，所述的氨基酸标志物选自犬尿氨酸，马尿酸和氧脯氨酸中的一种或两种以上。