[发明专利]一种96孔板磁珠提取口腔拭子DNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别地，涉及一种96孔板磁珠提取口腔拭子 DNA的方法。

背景技术

DNA提取是分子生物学的基本实验，它是不断发展的基因芯片检测中最基本的方法，也是基因芯片制备、分析和诊断的前提，因此，DNA提取是生物学最基础的技术之一。

成功的核酸分离纯化需要四个重要的步骤：组织或细胞的破碎和裂解、核蛋白复合体的变性、核酸酶的灭活以及污染物的去除，通过理想的抽提方法可以获取高质量的靶核酸，同时没有蛋白、糖、脂和其它核酸污染等。

目前，常用的DNA提取方法主要有玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法等物理方法，CTAB法、异硫氰酸胍法、碱裂解法等化学方式，以及酶提取法等生物提取方式；根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂提取等。其中，植物来源的DNA提取方法主要有十六烷基三乙基澳化按(CTAB) 法、SDS法和高盐低pH法等；细菌、真菌来源的DNA提取方法为碱裂解法、煮沸法、SDS裂解法以及Triton-溶菌酶裂解法等；动物来源的DNA最为经典的提取方法主要有酚抽提法、异丙醇沉淀法、甲酞胺裂解法，现行的很多方法都是在此基础上改进得来。

口腔黏膜为复层鳞状上皮，具有代谢旺盛、更新快、易脱落的特点，它由多层细胞组成，基底层具有旺盛分裂能力，其上皮脱落细胞虽然细胞核固缩，但与其他组织细胞一样具有完整的基因组DNA，从而成为法医学和遗传学DNA 多态性检测分型的生物性检验材料。既往多采用酚氯仿法或Chelex-100等方法，存在酚、氯仿污染或收获率低、纯度不高等缺点。

采用口腔拭子法(口腔脱落细胞)提取口腔上皮细胞是一种非介入、无痛苦、无创伤、简单的DNA标本采集方法，该方法适用于采集任何年龄段人群的 DNA样本，同时也可应用于新生儿、婴幼儿或老弱病残者等不便采血人群之用。

目前，口腔拭子DNA的提取多采用96孔板磁珠提取，处理口腔拭子样本时，需要先将拭子头剪下放入1.5ml左右离心管中，加入消化液及蛋白酶K，进行细胞的裂解和酶解反应后，再转入96深孔板进行后续的实验。一方面，两次分步操作的方式增加了操作步骤、造成时间浪费，同时在样品转移的过程中，也极大的增加了混样的风险。

发明内容

本发明提供了一种96孔板磁珠提取口腔拭子DNA的方法，解决了现有技术中口腔拭子DNA提取样品易混样的问题。

为实现上述目的，本发明提出了一种裂解及酶解口腔拭子DNA的方法，包括如下步骤：

(1)取细胞培养板，按照顺序一一对应空位，将口腔拭子头置于深孔板中；

(2)向所述细胞培养板中加入消化液和蛋白酶K；

(3)密封所述细胞培养板；

(4)将所述细胞培养板于振荡器上充分混匀并水浴处理，得到DNA酶解液。

所述细胞培养板为96孔板。

所述细胞培养板为96深孔板。

所述步骤(3)中，使用所述细胞培养板的专用胶垫进行密封。

所述水浴处理步骤的温度为56℃。

所述消化液为BL Buffer。

所述消化液的加入量为500ul。

所述蛋白酶K的加入量为20ul。

本发明还公开了一种96孔板磁珠提取口腔拭子DNA的方法，包括如下步骤：

(A)按照所述裂解及酶解口腔拭子DNA的方法，得到所述DNA酶解液；

(B)将所述DNA酶解液转移到新的细胞培养板上，按照现有技术常规方法进行后续的DNA提取。

所述步骤(B)中，还包括加入磁珠进行提取的步骤。

本发明所述96孔板磁珠提取口腔拭子DNA的方法，在处理拭子样品时，直接以96深孔板为载体，并处理获得DNA酶解液，可以直接将所述DNA酶解液置于新的细胞培养板上进行常规后续处理，整个过程将从离心管转移时混样的风险降到最低，同时减少操作步骤，节省了操作时间。

附图说明

图1是本发明实施例1中96孔板提取口腔拭子DNA的操作示意图；

图2是本发明实施例1中96孔板提取口腔拭子DNA的另一角度操作示意图；

图3是本发明对比例中单管离心管提取口腔拭子DNA的操作示意图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1