[发明专利]黄褐毛忍冬中抗血管紧张素转化酶活性成分的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于黄褐毛忍冬化学成分研究技术领域，涉及一种黄褐毛忍冬中抗血管紧张素转化酶活性成分的筛选方法。

背景技术

中草药是人类文明的瑰宝，在人类医学史上发挥着不可替代的作用。由于具有无污染，无公害，高效低毒的特点，为世人所青睐。大量实验表明中草药对治疗高血压等心血管疾病有着很好的效果。降血压有效的中药材很多，如钩藤、葛根、野菊花、夏枯草等，据统计有100多种。因此从中草药中筛选ACEI意义重大，不仅可以为开发新型的ACEI类降压药物做一些前期工作，还可以从抑制ACE活性的角度探讨中草药的降压机理。自从1965年Ferria等人从南美蝮蛇毒液中首次发现天然ACEI以来，大量研究发现ACEI广泛存在于天然产物中。天然ACEI与合成ACEI相比具有以下优点：(1)安全性高。由于是以食品和温和的天然药物为原料，因此不会对人体造成伤害。(2)降压效果温和、专一、持久。天然ACEl只会对高血压患者有降压效果，对正常人血压没有影响。(3)无副作用。目前临床降压类药物多有副作用，而还未见天然ACEI副作用的报道。从天然资源中寻找ACEI，已成为国内外学者研究的重要课题。

目前从天然资源中得到的ACEI主要有三大类，源于食物蛋白的肽类物质、有机多酚酸及黄烷醇类物质和生物碱类物质。其中通过酶解ACE降压肽的报道最为多见，科学研究者们已经从昆虫、动物、植物、奶制品和海洋生物蛋白的酶解物中发现了大量具有ACEI活性的短肽。除ACE抑制肽外，有机多酚酸类和黄烷醇类物质对ACE的抑制活性报道也较多。如我国20余年前从植物沙棘中提取出的总黄酮化合物-醋柳黄酮，已用于临床，研究表明可降低内皮素，升高NO，抑制ACE的活性和AngⅡ生成而降压。Actis-Goretta组的实验结果表明，富含黄烷醇的物质，如红酒、白酒、茶和巧克力等对ACE的活性具有抑制作用。Ottaviani等人测得花青素的二聚物、四聚物和六聚物对ACE抑制活性的IC50值分别为97.0、4.4和8.2mM。Loizzo等从中药高樗中发现了6个具有ACE抑制活性的黄酮化合物。高小平等人从丹参水溶性部分提取出具有ACE抑制活性的丹酚酸B。有关生物碱类物质对ACE抑制作用的报道较少，kang等人发现贝母提取物对ACE有抑制作用，其中去氢贝母碱、贝母碱和贝母素为活性成分。

忍冬属是忍冬科的模式属，全世界约200种，我国有98种，广布于各省区。属内有不少药用植物，如金银花是有悠久历史的著名中药，本属植物的花蕾作为金银花中药材商品的约有18种。由于该属植物有多种生理活性且分布广泛，长久以来，忍冬属植物的化学成分和生物活性成为研究的热点之一。

黄褐毛忍冬是忍冬科忍冬属植物，具有清热解毒、疏散风热的功效，用于臃肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒。

目前，国内外对黄褐毛忍冬的化学成分和药理活性研究报道较少。我们初步研究发现，黄褐毛忍冬90％乙醇提取物的氯仿萃取部分对血管紧张素转化酶(ACE)显示较强的抑制活性。进一步实验表明，黄褐毛忍冬含有黄酮类、三萜类、倍半萜及酚酸类等化学成分，并从中得到多个单体化合物。为了阐明黄褐毛忍冬的ACEI活性成分，我们对其氯仿提取部位进行系统的提取分离和纯化，并利用已有的研究基础进行活性筛选，以期寻找活性高、毒副作用小的ACEI活性成分。通过本项研究，可进一步开发利用黄褐毛忍冬植物资源，为新型降压药物的研制寻找先导化合物。

发明内容

为实现上述目的，本发明提供一种黄褐毛忍冬中抗血管紧张素转化酶活性成分的筛选方法，筛选出具有高活性的柏双黄酮和洋芹素，解决了现有技术中存在的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种黄褐毛忍冬中抗血管紧张素转化酶活性成分的筛选方法，具体按照以下步骤进行：

步骤1、将原材料黄褐毛忍冬粉碎，用乙醇回流提取3次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，得流浸膏；

步骤2、将流浸膏加水稀释，用氯仿萃取，得到氯仿提取物；

步骤3、氯仿提取物经硅胶柱层析，以氯仿-甲醇(100:1～1:1)梯度洗脱，以硅胶薄层色谱指导合并相同组分，得流分1～17；

步骤4、对上述17组流分，分别进行活性测试；

步骤5、选择活性好的流分，经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇(60:1～8:1)梯度洗脱，再经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以氯仿-甲醇(1:1～0:1)为洗脱剂洗脱；

步骤6、经上述分离后得到乌苏酸、柚皮素、洋芹素、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、柏双黄酮和咖啡酸。