[发明专利]一种米兰花组培繁殖的种质保存方法

说明书

本发明公开了一种米兰花组培繁殖的种质保存方法，包括以下技术环节：1）米兰花预处理；2）外植体取材、消毒与接种；3）不定芽诱导；4）慢生长增殖保存种质；5）活化；6）不定芽壮根后移栽。本发明提供的米兰花组培繁殖的种质保存方法可显著延长米兰花种质的保存时间，同时大大节省保存所需的劳力、物力和空间，而且操作简便，米兰花性状保存稳定可靠，移栽成活率高，移栽后米兰花植株生长健壮，有效保持了米兰花种质的优良性状，具有重要的产业推广价值。

技术领域

本发明涉及一种米兰花组培繁殖的种质保存方法，属于园林植物科学技术领域。

背景技术

米兰花，（Aglaia odorata Lour），又名树兰、四季米兰、碎米兰，是楝科米仔兰属常绿灌木或小乔木，米仔兰届常绿小乔木，适应温暖多湿的气候条件，成年植株需充足阳光。米兰的枝叶茂密，叶色葱绿光亮，一年内多次开花，夏秋最盛，开花时清香四溢，气味似兰花，清新幽雅、舒人新身、芳香扑鼻，具有极高的观赏价值。米兰花原产亚洲南部，现广泛种植于世界热带各地。在东南亚各国米兰花栽培极广，在我国福建、广东、广西、四川、云南等省多有分布，北方地区多用于盆栽。

米兰花除用于观赏性花卉，还具有极高的药用价值。米兰花其花枝叶可入药，具有治肠膈涨满、噎膈初起、咳嗽头昏、感冒胸闷、解醉酒、治跌损伤、风湿关节炎、肿痛等功效。在两广地区米兰花常添加至黑茶中，既可增加黑茶的甘醇度，又可提升茶的香味。米兰花还是天然香水的理想原料，既具有宜人的清香，又有一定的保健功能。米兰木质细致，是雕刻和制作家具的理想材料。因此米兰花具有非常好的应用前景。

一直以来，米兰花生产上都采用扦插等无性繁殖方式进行栽培扩繁。长期无性繁殖过程中，病毒逐代积累，从而造成米兰花品种退化严重，优良种性严重退化甚至丧失，园林观赏价值和药用价值大大降低，在生产中逐步淘汰。目前，米兰花基础性方面的研究报道比较少，仅限于栽培生产应用研究和有限的药用价值评价，对米兰花组织培养方面的研究还鲜有报道。随着米兰花市场开发的如花如荼的开展，米兰花基础性研究的必要性也越来越大，米兰花优良种质资源的保存技术也日益提上日程。

组培繁殖的种质保存是将种质资源的外植体在离体状态下采用组织培养的方式进行继代，利用设备进行贮藏保存，其好处是所占空间小，所需的人力资源少，而又能较好地保护物种及其遗传的多样性。目前米兰花组培繁殖的种质保存方法尚未建立，因此加强米兰花组织培养研究，探索建立保存时间久、稳定可靠的米兰花组培繁殖的种质保存方法对米兰花产业发展具有重要的推动价值。

发明内容

本发明的目的是针对米兰花生产上长期无性繁殖造成的种性退化严重的缺陷，首次建立了一种保存时间久、稳定可靠的米兰花组培繁殖的种质保存方法。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种米兰花组培繁殖的种质保存方法，其特征在于，该种质保存方法包括以下技术步骤：

1）米兰花预处理：

将生长健壮、无病虫害的米兰花植株取材后进行根部清洗，然后将根部浸入装有0.01g/L的多氯苯甲酸溶液中，7-8℃低温黑暗预处理3-5天；

2）外植体取材、消毒与接种

将米兰花植株超纯水洗净后转入超净工作台进行无菌操作，剥去叶片，露出米兰花嫩茎，将嫩茎先用浓度为75%酒精浸泡30s，然后投入加入了数滴吐温80的0.1%升汞溶液中，表面消毒12-15m后用灭菌水冲洗3-5次，滤纸吸干，将嫩茎用灭菌解剖刀分割成0.6-0.9cm的小茎段，然后将小茎段正向接种于装有诱导培养基的三角瓶中；

3）不定芽诱导

培养室温度控制为27±1℃，光照强度控制为1500-2000Lx，光周期控制为光12h/暗12h，25-35天诱导出不定芽；

4）慢生长增殖保存种质：