[发明专利]BALF4多肽的克隆、表达和应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种BALF4多肽的克隆、表达和应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属于人类疱疹病毒第四型，于1964年由Epstein和Barr在研究非洲儿童恶性淋巴瘤时发现。EB病毒是一种嗜淋巴细胞病毒，是人类普遍感染的病毒之一，感染全球超过90％的人群。EB病毒因兼具较高感染率和致癌性，已于1997年被国际癌症研究中心定为I类致癌物。

EB病毒经唾液或密切口腔接触传染。EB病毒主要感染B细胞和上皮细胞，其中口咽部上皮细胞是EB病毒感染与复制的首要位点。EB病毒感染主要分为四个阶段：(1)通过口头传播的EB病毒在口咽部易感细胞(一般为鳞状上皮细胞及侵润B淋巴细胞)中进行复制；(2)在口咽部淋巴组织中EB病毒通过潜伏感染B细胞而定植于宿主体内；(3)大多数情况下，EB病毒以沉默的潜伏感染方式永久存在于循环的记忆B细胞群中(主要发生在健康携带者中)；(4)EB病毒偶尔也会被激活，从潜伏感染状态转换至裂解感染状态，导致病毒再次在口咽部复制并成为传染源。EB病毒蛋白通过模拟B细胞增殖和生存信号保障病毒复制，同时又不被宿主的免疫系统识别，从而建立终生感染，这种免疫逃逸方式还有利于病毒传播。

EB病毒通过包膜糖蛋白gp350/gp220与B细胞2型补体受体CD21(CR2)结合进入并感染B细胞。三种糖蛋白(gp42，gH和gL)组成的复合物与MHC II(主要组织相容性复合物II)结合促进病毒包膜与细胞膜的融合。病毒进入上皮细胞是由病毒BMRF2与β1整联蛋白的结合介导；与B细胞膜融合过程类似，gH与gL组成的复合物也参与了病毒包膜与上皮细胞膜的融合。gp110能够提高病毒感染靶细胞的效率。此外，EB病毒还能感染T细胞，巨红细胞，粒细胞和自然杀伤(NK)细胞。EB病毒感染这些细胞的机制尚不明确，病毒包膜蛋白可能参与EB病毒感染T细胞及其它免疫细胞的过程。

EB病毒感染能够导致传染性单核细胞增多症，25％以上的青少年感染者患有EB病毒诱发的传染性单核细胞增多症，美国每年新增约125,000例传染性单核细胞增多症病例。该症患者会出现发热、咽喉炎、头痛、淋巴结肿大、肝脏及脾脏肿大等症状；若不及时接受治疗，患者病情将进一步加重并发展为无菌性脑膜炎与重度肝炎，严重危害了青少年的健康。EB病毒还与淋巴细胞肿瘤及上皮细胞肿瘤的发生密切相关，例如，EB病毒相关的淋巴细胞肿瘤包括伯基特淋巴瘤，霍奇金氏淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。EB病毒相关的淋巴瘤恶性程度高，发展快，并且常规化疗效果差。研究显示，全球每年新增约28,000例EB病毒相关的霍奇金淋巴瘤。EB病毒相关的上皮细胞肿瘤主要包括鼻咽癌和胃癌，数据显示，全球每年新增约78,000例EB病毒阳性鼻咽癌病例和约84,000例EB病毒阳性胃癌病例。我国的EB病毒相关鼻咽癌的发病率较高；在我国华南地区，每十万名中年男性中有50人患EB病毒阳性鼻咽癌。此外，EB病毒还与免疫缺陷或免疫抑制病人中的恶性肿瘤发生密切相关。EB病毒与艾滋病毒共感染极大地增加感染者患淋巴瘤的风险，研究表明，30％-40％艾滋患者携带有EB病毒，通过抗病毒药物治疗不会降低艾滋病人中EB病毒相关淋巴瘤的发生率；因器官移植而导致免疫抑制病人中B细胞淋巴瘤发病率极高，且移植病人中B细胞淋巴瘤的致死率高达50％。

鉴于EB病毒及其诱发的相关疾病的危害，现有的研究主要集中在抗EB病毒感染及其诱发肿瘤治疗两方面。针对抗病毒感染的策略主要为抗病毒药物治疗方法，抗EB病毒药物多为广谱性抗疱疹药物。EB病毒诱发肿瘤的治疗策略包括应用EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的治疗方法和采用单克隆抗体的治疗方法。T细胞介导的抗肿瘤治疗策略是通过将CTL注入患者体内，激活机体免疫系统，从而达到杀伤肿瘤的效果；CD20单克隆抗体疗法对EB病毒诱发的CD20阳性恶性肿瘤具有较好的治疗效果。然而，抗病毒药物不能有效治疗EB病毒诱发肿瘤；EB病毒相关肿瘤的治疗方法尚处于研究阶段，EB病毒特异性CTL对于器官移植后病毒诱发的恶性肿瘤治疗效果不理想，CD20单克隆抗体疗法的有效性还有待明确。因此，抗病毒疫苗成为防治EB病毒及其诱发疾病的最佳策略。