[发明专利]一种高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法和应用

权利要求书

1.一种高灵敏表达绿色荧光蛋白的逆向神经环路示踪的重组伪狂犬病毒的制备方法，包括下述步骤：

1)具备高效表达绿色荧光蛋白能力的克隆：以pCDNA3.1(+)为载体，采用同源重组的方式将SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5顺次插入到载体，获得克隆命名为pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA；

2)构建高灵敏度表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒：将SEQ ID NO.16插入到经过MluI和ClaI双切的pCDNA3.1(+)-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA；将SEQ ID NO.19插入到经过AscI单切的pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA，从而获得质粒pCDNA3.1(+)-left arm-CAG-兔β-globin-EGFP-F2A-EGFP-T2A-EGFP-WPRE-BGHpA-right arm；将所得的质粒转染BHK21细胞后感染伪狂犬病毒Bartha株，收集细胞培养基上清；纯化后即获得高灵敏度表达绿色荧光蛋白的重组伪狂犬病毒。

2.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在建立伪狂犬病毒的药物筛选平台中的应用。

3.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在研究药物抑制伪狂犬病毒作用机制中的应用。

4.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒疫苗的开发中的应用。

5.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒感染的动物模型的建立中的应用。

6.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在伪狂犬病毒病毒复制和致病机制的分析中的应用。

7.权利要求1所述制备方法制得的重组伪狂犬病毒在哺乳动物的脑神经环路进行示踪中的应用。