[发明专利]一种对细胞内活性氧含量进行检测的方法

权利要求书

1.一种对细胞内活性氧含量进行检测的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，选择人肝癌细胞株HepG2作为试验用细胞株，在显微镜下观察其生长状态，去除原有培养基，用PBS缓冲液清洗细胞1~2次，往培养皿中加入1mL胰蛋白酶-EDTA溶液，对细胞进行消化；待细胞消化结束，加入10mL含血清的新鲜培养基终止消化，将得到的细胞悬液吹匀；

步骤2，用血球计数板测定细胞悬液中的细胞密度，以每孔10000个细胞的密度将细胞种入96孔板中；

步骤3，种板24h后，对细胞进行染毒暴露，将不同浓度的暴露污染物砷分别加入不同的孔板中；

步骤4，利用DCFH-DA探针检测砷暴露诱导下细胞内活性氧的含量，染毒24h后，将每个孔板中原有培养基采用50μL终浓度为10μM的DCF孵育液替换，于37°C下孵育25 min，孵育后用PBS缓冲液清洗2次，采用酶标仪检测各孔板内细胞的DCF荧光信号值；

步骤5，再向每个孔板中加入100μL终浓度为5μg/ml 的Red Dot 1孵育液，于37°C下孵育15 min，孵育后用PBS缓冲液洗涤2次，采用酶标仪检测各孔板内细胞的Red Dot 1荧光信号值，得到每个孔板中活细胞的数量；

步骤6，将步骤4得到的每个孔板中的DCF荧光信号值除以对应孔板中细胞的Red Dot 1荧光信号值，得到不同暴露污染物浓度下对应每个活细胞的荧光信号值；

其中，DCFH-DA荧光染料的激发波长为485nm，发射波长为530nm；Red Dot 1荧光染料的激发波长为630nm，发射波长为710nm。。