[发明专利]一种基于miR-221的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于miR‑221的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用，由间充质干细胞转染或感染核酸制备得到，其高表达miR‑221，具体制备为将人间充质干细胞转染miR‑221模拟物（mimic或agomir）或感染表达miR‑221的病毒制备得到；为了进一步提高MSCs靶向肝损伤部位的效率，改善肝功能和组织结构恢复的效果，可以利用碱性成纤维细胞生长因子处理间充质干细胞。本发明的肝损伤靶向间充质干细胞对肝损伤有高效的靶向性，有助于减轻肝纤维化、改善肝功能，稳定性高，便于保存和运输，使用安全，可为肝病患者带来福音。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于miR-221的肝损伤靶向间充质干细胞及其制备方法与应用。

背景技术

各种原因如病毒、寄生虫感染、乙醇、药物或化学毒害以及免疫功能紊乱等均能引起急、慢性肝损伤，长期或反复作用还可能导致肝硬化甚至发展到肝衰竭、终末期肝病。肝病一旦发展到终末期，常规治疗仅能缓解患者的临床症状，且疗效不佳。间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一种中胚层来源的具有多分化潜能的成体干细胞，其主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中的含量最为丰富。间充质干细胞具有干细胞所特有的无限增殖及自我更新的能力，在体外传代培养及冻存复苏后仍能够保持其“干性”；具有多分化潜能，在合适的体内外环境下，可分化成为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种类型细胞；表面抗原不明显，具有低免疫原性，且具有免疫调节功能，故被作为理想的种子细胞广泛应用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。国内外已有学者将不同来源的MSCs应用于肝病动物模型、临床前及临床肝病的治疗，取得了一些有意义的发现和可喜的治疗效果。研究显示，MSCs在体外可被诱导分化成具有肝细胞的形态、表型和功能特征的细胞，此类细胞能表达白蛋白(albumin)、甲胎蛋白(alpha-fetal protein, AFP)、细胞角蛋白(cytokeratins, CK) CK8、CK18等肝系细胞和胆管细胞的特异性标志物。

但MSCs移植治疗肝病仅处于理论阶段，在临床应用中仍存在许多亟待解决的问题，特别是疗效并不稳定，个体差异较大；更有研究显示MSCs移植对肝功能、组织结构的修复无作用，甚至有负面的影响。究其原因，一方面，移植的MSCs只有定植/归巢到病变部位，才能有效地发挥治疗和修复作用，但体内研究发现只有少量的移植细胞富集到了损伤或病变部位；其次，移植的MSCs定植到肝损伤部位，有的分化为肝巨噬细胞(kupffer cell)，而肝巨噬细胞对于肝星状细胞(hepatic stellate cell)的活化、增殖、迁移、存活等有促进作用，不利于炎症和纤维化的修复；有的召集肌成纤维细胞(myofibroblast)而促进其分泌胶原产生纤维化；有的可以转分化为功能性的肝星状细胞和肌成纤维细胞，更多地分泌胶原等细胞外基质，从而进一步增强了肝脏的纤维化损伤（参见：Zhao Q, Ren H, Zhu D,Han Z. Stem/progenitor cells in liver injury repair and regeneration. BiolCell, 2009, 101(10): 557-571；Ji J, He BP, Dheen ST, Tay SS. Interactions ofchemokines and chemokine receptors mediate the migration of mesenchymal stemcells to the impaired site in the brain after hypoglossal nerve injury. StemCells, 2004, 22(3): 415-427）。