[发明专利]一种培育无刺黑果枸杞的方法

权利要求书

1.一种培育无刺黑果枸杞的方法，其特征是培育步骤如下：

(1)无性系组培苗的获得

以有刺黑果枸杞的茎或成熟种子为原始供体材料，采用茎或叶为外植体培养获得无菌组培苗；

(2)壮苗培养

将上步获得的组培苗接种于改良的1/4或1/2MS固体培养基，置于自然日光下进行壮苗培养；改良的1/4MS固体培养基，是除了KH₂PO₄ 和KNO₃的含量与MS培养基一样，其它大量元素、微量元素、铁盐及有机物质含量均为MS培养基1/4的一种培养基；而改良的1/2MS固体培养基是除了KH₂PO₄ 和KNO₃的含量与MS培养基一样，其它大量元素、微量元素、铁盐及有机物质含量均为MS培养基1/2的一种培养基；改良的1/4和1/2MS固体培养基的蔗糖浓度为15～20 g/L,琼脂浓度为4.3～7.0 g/L,pH值为5.4～5.8；

（3）炼苗及移栽

生根完整小植株在壮苗培养之后进行移栽驯化；移栽介质采用菜园土、腐殖土、沙子、草炭其一或其两种以上混合物；移栽介质121℃高压灭菌30 min～2 h；将壮苗之后的带根植株冲洗干净，并迅速置于多菌灵或甲基托布津工作液中浸泡5～10 min；之后将苗栽植于盆钵中的移栽介质中，浇透蒸馏水之后覆盖带孔塑料膜或带孔保鲜膜保湿；刚移栽的组培苗要置于散射光下，避免日光直射；定期浇蒸馏水使栽培介质的含水量保持在100%田间持水量，从移栽第5～10天开始逐渐揭去保鲜膜或塑料膜；待植株明显开始生长之时再逐渐挪到自然日光下；整个过程的盆土含水量均要保持在80%～100%田间持水量，环境温度保持在18～28℃；

（4）盆栽控水处理及浇灌营养液

对移栽驯化成活的健康盆栽组培苗进行控水处理并定期浇灌1/8改进的MS营养液或1/4改进的MS营养液：每日浇水，使土壤含水量保持在75%～100%田间持水量；间隔10～30天浇灌一次营养液，浇灌营养液的同时要保证土壤含水量与原先设置的相同，即75%～100%田间持水量；盆苗置于日光下，环境温度保持在18～28℃；此步提到的改进的MS营养液不含蔗糖和琼脂；其大量元素及铁盐含量与MS培养基相同；不含硫酸铜和氯化钴,但其它微量元素的含量为MS培养基的1/2；不含肌醇和甘氨酸，但其它有机物质的含量与MS培养基相同；1/8改进的MS营养液的各种物质含量为改进的MS营养液的1/8；1/4改进的MS营养液的各种物质含量为改进的MS营养液的1/4。

2.根据权利要求1所述的培育无刺黑果枸杞的方法，其特征是以有刺黑果枸杞的茎段为最初的外植体培养无菌组培苗：采集温室内的有菌有刺黑果枸杞茎，在无菌超净工作台用70-75%体积比酒精浸泡茎段30 S～1 min，再用0.1～0.2%质量体积比的氯化汞水溶液或者2%质量体积比次氯酸钠溶液浸泡2～5 min，无菌水冲洗3～6遍；将1～3 cm长的茎段接种到添加 6-BA 0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的1/2MS或MS固体培养基上，20～28℃每天8～16小时光照培养；待接种的茎段腋芽萌发出嫩枝之后，采集嫩枝的叶片或茎段为外植体：将生长良好的幼叶片横向剪或切为直径3～5mm的小块，接种到含6-BA 0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的MS固体培养基上，20～28℃下置于微弱散射光下培养1～4周；之后转到正常光照下培养，每天光照8～12 h；将茎剪切为0.5～2 cm的小段，下端朝下插入含6-BA0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的MS固体培养基上，20～28℃下每天光照8～12 h；或者将萌发嫩枝插于生根培养基，获得生根小植株之后，再取其茎、叶作为外植体来培养无性系；继续采集无菌无性系的幼嫩茎和叶为外植体，通过离体培养获得次生无性系；用到的MS固体培养基添加0.43～0.7%质量体积比的固化剂琼脂，3～4%质量体积比的蔗糖；121℃高压灭菌15～20min之前用NaOH或KOH溶液将pH值调节到5.4～5.8；1/2MS固体培养基添加蔗糖、大量元素、微量元素、铁盐和有机物质浓度均为MS固体培养基的一半，琼脂含量、pH值及灭菌条件与MS培养基一致。