[发明专利]检测血液中CD4+T细胞数量的侧向层析试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测血液中CD4⁺T细胞数量的侧向层析试剂盒及其制备方法。该试剂盒包含样品处理管和试纸条；样品处理管含有全血样品处理液和信号物标记的CD4抗体；试纸条包括底板和在底板上附着有沿层析方向紧密相连的样品垫、滤血层、层析膜层和吸水垫；样品垫部分压在滤血层上，滤血层部分压在层析膜层上，吸水垫部分压在层析膜层上；在层析膜层上设置检测线和质控线，滤血层、检测线、质控线和吸水垫依次排列。本发明能快速检测人体血液中的免疫细胞数量有利于及时快速的对患者免疫功能做出评价，对于各类疾病的诊疗都具有重大意义。

技术领域

本发明属于医学检测免疫分析技术领域，特别涉及一种检测血液中CD4⁺T 细胞数量的侧向层析试剂盒及其制备方法。

背景技术

自1981年世界第一例艾滋病病毒感染者发现至今，短短30多年间，艾滋病在全球肆虐流行，已成为重大的公共卫生问题和社会问题，引起世界卫生组织及各国政府的高度重视。

T淋巴细胞是一类具有抗感染和肿瘤免疫的细胞，它主要分为CD4⁺T细胞与CD8⁺T细胞。CD4⁺T细胞主要起辅助体液免疫和细胞免疫激活的作用。CD4⁺T 细胞表面的CD4分子是艾滋病病毒的受体，当HIV病毒进入人体后，它感染并损坏CD4⁺T淋巴细胞，导致机体体液免疫和细胞免疫被抑制，致使整个人体免疫功能遭到破坏，最终丧失对各种疾病的抵抗能力而导致死亡。因此可通过 CD4⁺T淋巴细胞记数能够直接反映HIV感染患者免疫系统损害状况。

正常成人的CD4⁺T细胞为每微升的血液中含有500～1600个，艾滋病病毒感染者的CD4⁺T细胞可能会出现进行性或不规则性下降，提示感染者的免疫系统受到了严重损害，当每微升血液中CD4⁺T细胞小于200个时就可能会发生多种严重的机会性感染或肿瘤。目前最新规定每微升血液中HIV感染者的CD4⁺T 细胞数量水平低于350个就应该开始进行治疗。

目前检查艾滋病的主要方法包括：(1)机体免疫功能检查，主要包括CD4⁺T 细胞数量检测和CD4⁺T细胞与CD8⁺T细胞比值检测；(2)PCR技术检测HIV 病毒核酸；(3)HIV抗体和抗原检测，采用酶联免疫吸附法、免疫荧光检测法、免疫印迹检测法、侧向层析试纸法、明胶颗粒凝集试验、放射免疫沉淀法等。CD4⁺T细胞数量检测相比于病毒核酸检测和病毒抗体检测，能更加直观的反应出患者的免疫状态，为患者提供合适的治疗时机和治疗方式，从而达到精准治疗、精确用药的目的，对于艾滋病的治疗防控具有重要意义。而目前针对CD4⁺T 细胞数量检测主要方法包括流式细胞术法、微流控芯片计数法以及显微镜人功计数法。流式细胞术法和微流控芯片计数法，具有检测样本量大和检测准确率高等优势。但需要昂贵的流式细胞仪或者微流控操控平台、专业的实验技术人员和特定的实验环境等条件。这些条件不利于艾滋病的实时防控，也不利于艾滋病的精准诊疗在资源匮乏的国家和地区的普及。显微镜人功计数法，相比流式细胞术检测成本更低，仪器要求更低，适合普通检测实验室，但同样需要专业的技术人员在实验室检测、操作繁琐、人为误差大，不适合快速检测和现场检测。

综合上所述：已上方法都普遍存在如下几个问题：第一，需要昂贵的仪器设备；第二，需要专业的检测实验室和专业的技术人员；第三，大部分仪器成本和检测成本昂贵难以普及。侧向层析试纸条在诊断领域的应用具有如下优点：第一，无需大型仪器设备；第二，操作简单，无需专业技术人员可用于现场检测；第三，检测成本低，检测速度快，适合推广应用。但目前市面上的侧向层析试纸用于检测诊断领域主要的检测对象是血清或血浆中的蛋白分子或核酸分子，而对于全血的检测，特别是针对血液中细胞数量检测侧向层析技术还是一片空白。

发明内容