[发明专利]一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法

说明书

技术领域

本发明属于血液检测领域，涉及一种血清中尿素氮含量的测定方法，尤其涉及一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法。

背景技术

尿素是人体蛋白质代谢的主要终末产物，氨基酸脱氨基产生NH₃和C0₂，两者在肝脏中合成尿素。通常肾脏为排泄尿素的主要器官，尿素从肾小球滤过后在各段小管均可重吸收。各种肾实质性病变，如肾小球肾炎、间质性肾炎、急慢性肾功能衰竭等均可使血尿素氮增高。如能排除肾外因素，尿素氮可作为尿毒症诊断指标之一。

血清(或血浆)中的尿素氮，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟(DAM)共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。其颜色的深浅与血清(或血浆)中尿素氮的含量成正比，与同样处理的尿素氮标准液比色，即可测算出血清(或血浆)中尿素氮的含量。由于此方法干扰性大，目前临床实验室多采用尿素酶偶联法，用尿素酶分解尿素产生氨，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下使NADH氧化为NAD⁺时，通过340nm吸光度的降低值可计算出尿素氮含量。但是，尿素酶偶联法测试时间较长，步骤繁琐，检测效率慢，且大量的人为操作易造成检测结果不准确。

发明内容

本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，以克服现有技术的缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，步骤一、配制若干个含有不同尿素氮含量的血清标定液；步骤二、用近红外光谱仪对每个血清标定液进行光谱采集；步骤三、根据血清标定液的近红外光谱，建立鉴别模型；步骤四、用近红外光谱仪对待检测的血清样品进行光谱采集，将血清样品的光谱与鉴别模型对比，获得血清样品中的尿素氮含量。

其中，步骤一中，血清标定液是指已知其尿素氮含量的血清样品。且血清标定液的数量需满足建立模型的要求。优选的，血清标定液的数量至少为30个。若干个血清标定液的尿素氮含量的范围为2-7mmol/L。

步骤三中，鉴别模型是指血清标定液的光谱与血清标定液中尿素氮含量之间的对应关系。

进一步，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，还可以具有这样的特征：其中，步骤一是采用尿素酶偶联法测定血清中的尿素氮含量，并配制出不同尿素氮含量的血清标定液；尿素酶偶联法是指采用尿素酶、谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸、NADH与血清混合，根据NADH与血清反应前后的变化，即依据NADH与血清反应前后的结果，得到血清中尿素氮的含量。

其中，上述血清可以为采集而来的多份血清，用以配制血清标定液。

进一步，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，还可以具有这样的特征：其中，尿素酶偶联法的具体步骤为：步骤a、试剂与血清混合，并于36～38℃温浴3-6min；试剂包括尿素酶、谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸和NADH；步骤b、在340nm波长处测量试剂和血清的混合液中NADH的吸光度下降速率，并与相同处理的尿素氮标准液比较，计算获得样品中尿素氮的含量。

其中，步骤b中，“与相同处理的尿素氮标准液比较”是指：配置尿素氮标准液，加入试剂，混合均匀并温浴，其中，尿素氮标准液与血清等量，试剂的加入量与其加入至血清中的量相等，温浴温度和时间也与样品的处理条件相同。然后，在340nm波长处测量试剂和尿素氮标准液的混合液中NADH的吸光度下降速率，由于尿素氮标准液的浓度已知，通过计算可知血清中尿素氮的含量。并且，尿素氮标准液可以与血清同时处理，以使检测结果更加准确并节省检测时间。

尿素氮标准液的配制方法为：称取尿素，溶于无氨去离子水中，并用无氨去离子水定容。尿素氮标准液的浓度为6～8mmol/L。

进一步，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，还可以具有这样的特征：其中，试剂还包括磷酸盐缓冲液；磷酸盐缓冲液的pH指为7.7±0.2；优选的，磷酸盐缓冲液为TRIS-盐酸缓冲剂。

进一步，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，还可以具有这样的特征：其中，试剂还包括防腐剂；优选的，防腐剂为ProcIin-300。

进一步，本发明提供一种血清中尿素氮含量近红外光谱测定方法，还可以具有这样的特征：其中，试剂由磷酸盐缓冲液30～70nmol/L、尿素酶4000～6000U/L、谷氨酸脱氢酶8000～10000U/L、α-酮戊二酸140～180nmol/L、NADH2.0～4.0nmol/L、防腐剂150～250μl/L组成；试剂与血清的体积比为1:70～80。