[发明专利]自体来源的间充质干细胞向鼻粘膜样上皮细胞分化方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种自体来源的间充质干细胞向鼻粘膜样上皮细胞分化方法及试剂盒。本发明提供的分化方法采用自体来源丰富的脂肪间充质干细胞或其他干细胞经过分离、培养、诱导分化等步骤得到数量充足的鼻粘膜样上皮细胞，用于鼻粘膜受损患者进行鼻粘膜下细胞移植，可以对受损的鼻粘膜进行有效修复，恢复鼻粘膜生理功能、增加鼻腔容积和鼻腔阻力，阻断ENS慢性功能衰竭的发生和发展，有效缓解病人的不适症状；而用于移植的细胞来源于患者自身组织，具有取材容易、安全可靠、避免免疫反应等优点。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，尤其涉及一种自体来源的间充质干细胞向鼻粘膜样上皮细胞分化方法及试剂盒。

背景技术

人体的粘膜是指口腔、鼻腔、肠管、阴道、肠道等与外界相通的体腔内衬，是人体吸收、消化和交换营养物质的重要场所,具有防御、消化、免疫、神经内分泌等功能，构成机体抵抗创伤和病原体入侵的第一道免疫屏障，一旦受损就会引起相应的功能障碍，严重的甚至会导致死亡。

鼻粘膜是呼吸道粘膜的第一道防线，是空气调节和粘液纤毛清除、滤过作用的基础。手术或其他损伤导致的鼻粘膜渐进性的功能衰退所导致的空鼻综合症(Empty NoseSyndrome，ENS)，就是由于鼻粘膜功能障碍，吸入鼻腔的气体未经过加温，加湿等作用，直接进入肺部，使得气流不能进行正常的气体交换，肺泡通气及换气减少，不能维持正常肺容积，胸内负压降低，体循环和肺循环的动脉氧合的发生减少从而直接影响肺功能，造成呼吸困难、甚至窒息以及精神异常等复杂症状，影响正常的工作与生活。因此，对空鼻综合症患者的鼻粘膜进行修复十分重要。

现有治疗技术中一般采用一些鼻腔用凝胶或喷雾对受损的鼻粘膜处进行治疗和修复，虽然可以在一定程度上缓解鼻粘膜受损的状况，但效果有限，并不能很好地治疗鼻粘膜受损的状况，恢复鼻粘膜的相关功能，缓解空鼻综合症患者的症状。如果能采用鼻粘膜样上皮细胞对患者鼻黏膜处进行修复，将能最大程度的修复患者鼻粘膜受损处以及恢复鼻粘膜的相关功能。现有技术中也有一些对鼻粘膜干细胞进行分离培养技术，如CN201410228728.X公开了一种人类嗅粘膜间充质干细胞的分离培养方法，可以分离人类嗅粘膜间充质干细胞并进行培养，但该方法采用嗅粘膜间充质干细胞为原代细胞，存在嗅粘膜间充质干细胞来源少、采集时会对鼻粘膜产生损伤等问题，存在实际应用上的诸多困难。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种自体来源的间充质干细胞向鼻粘膜样上皮细胞分化方法，所述方法包括：将自体来源的间充质干细胞加入细胞诱导液中诱导分化得到鼻粘膜样上皮细胞，所述细胞诱导液主要是将DMEM干粉培养基、胎牛血清、EGF、FGF、氢化可的松溶液、谷氨酰胺、青霉素、链霉素用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述DMEM干粉培养基40-60g、所述胎牛血清4-6g、所述EGF 6-10μg、所述FGF 10-20μg、所述氢化可的松溶液5-10mL、所述谷氨酰胺0.15-0.3g、所述青霉素1-2×10⁵U、所述链霉素0.1-0.2g；所述氢化可的松溶液是将氢化可的松用无水乙醇溶解而成，每L所述无水乙醇溶解所述氢化可的松5-10mg。

EGF：表皮细胞生长因子，又名人寡肽-1，是人体内的一种活性物质，由53个氨基组成的活性多肽，能够促进细胞的增殖分化，从而以新生的细胞代替衰老和死亡的细胞。

FGF：成纤维细胞生长因子，能够促进内皮细胞的游走和平滑肌细胞的增殖。

本发明采用自体来源的间充质干细胞经过诱导分化成鼻粘膜样上皮细胞，用于鼻粘膜受损患者进行鼻粘膜下细胞移植，可以对受损的鼻粘膜进行有效修复，恢复鼻粘膜生理功能、增加鼻腔容积和鼻腔阻力，阻断ENS慢性功能衰竭的发生和发展，有效缓解病人的不适症状。

进一步的，所述细胞诱导液还含有阿拉伯半乳聚糖、烟酰胺和胰岛素，每L所述注射用水溶解所述阿拉伯半乳聚糖1-3g、所述烟酰胺0.2-0.5g、所述胰岛素0.05-0.1g。在细胞诱导液中加入阿拉伯半乳聚糖、烟酰胺和胰岛素，可以进一步提高脂肪干细胞向鼻粘膜样上皮细胞的分化效果。