[发明专利]一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于基因相关位点检测技术领域，具体涉及一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒。

背景技术

目前全世界糖尿病患者的数量已达3.66亿，全球每7秒种就有一人死于糖尿病。糖尿病是指以血糖增高为主要临床表现的慢性代谢性疾病，主要分为1型糖尿病和2型糖尿病，2型糖尿病占糖尿病患者90％以上。1型糖尿病是一种自体免疫疾病，是由于免疫系统对分泌胰岛素的胰腺β细胞作出攻击导致胰腺不能分泌足够的胰岛素。而2型糖尿病是由于各种致病因素导致组织器官产生胰岛素抵抗，即胰岛素相对缺乏，故通常临床上用胰岛素释放实验来区别糖尿病的类型。患者试验空腹及进食75克葡萄糖后30分钟、60分钟、120分钟和180分钟分别抽血测定胰岛素及C肽水平。若空腹胰岛素及C肽低于正常，且进食后不增高考虑为1型糖尿病；若空腹胰岛素及C肽低于正常、增高或降低，且进食后增高，则考虑为2型糖尿病。

2型糖尿病具体的致病原因仍然未知，现在的研究发现其是由遗传因素和环境因素共同作用导致的，其中遗传因素约占30％,环境因素约占70％。2型糖尿病的遗传风险是由多个基因共同决定的，目前为止,公认的2型糖尿病易感基因已经增至20个,同时还发现了13个影响空腹血糖的基因以及5个影响餐后血糖的基因。临床常规检查例如空腹及餐后血糖、糖化血红蛋白、C肽水平只能判断2型糖尿病的发生发展情况，但无法找到致病根源，无法根据这些指标做出及时的预防和根本性的治疗，而基因检测通过对2型糖尿病相关易感基因进行检查，能够准确的发现致病基因，准确率达到99.9999％，真正做到快速诊断疾病，发现致病根源，提前预知2型糖尿病发病风险，可通过调节饮食结构和生活方式，有效的控制疾病的发生与发展，防止并发症，还具有缩短检查流程，提升检查准确性，精确药物用量，减少药物毒副作用，提高药物治疗效果等一系列的优势。对此，我们应该尽量多发现和研究一些与2型糖尿病相关的基因易感性位点，做到有病先来防，有病正确对待并及早调整和治疗。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供一种用于检测ApoM启动子基因序列的引物对及其检测方法和试剂盒，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果可靠准确，试剂盒使用简便可行，为后续的检测手段以及进一步采取有针对性的健康管理、疾病预防提供参考依据。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种引物对，所述引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述引物对用于检测ApoM基因启动子区rs805396和-724两个位点。

一种用于检测ApoM启动子基因序列相关位点的检测方法，包括如下步骤：

A、提取全基因组DNA；

B、根据ApoM启动子基因序列及位点设计引物对，对提取的全基因组DNA进行PCR扩增，回收PCR产物并割胶纯化；

C、对纯化后的PCR产物进行测序，并分析测序结果来判断ApoM启动子基因是否发生突变。

一种用于检测ApoM启动子基因序列的试剂盒，所述试剂盒内包括基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

所述试剂盒内还设有控温装置。

所述试剂盒内设有托架，所述托架设有六个凹槽容纳腔，六个凹槽容纳腔内分别放置所述基因组DNA抽提试剂盒、PCR扩增产物纯化试剂盒、PCR反应试剂盒、BigDye测序反应试剂盒、无水乙醇试剂瓶和盛放引物对的容器。

所述凹槽容纳腔的内周向侧壁设有缓冲结构。

所述试剂盒包括盒体和盖合在盒体上的盒盖，所述盒盖与盒体铰接。

所述盒体与盒盖的盖合处设有密封垫。