[发明专利]一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法

权利要求书

1.一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1)在250mL三角瓶中，将30g芦笋根际土壤与100mL超纯水混合，密封瓶口，置摇床上振荡2h，而后用两层定性滤纸过滤，取滤液待用；

2)将步骤1)所得滤液以0.6mL/min的流速依次通过阳离子交换树脂柱、阴离子交换树脂柱，然后再将滞留在阴离子交换柱内的有机酸组分用1mol/L的HCl溶液洗脱，洗脱时的过柱流速为0.5mL/min；

3)取洗脱液用旋转蒸发仪以35℃的温度、80～90r/min的转速浓缩去除液相组分，用超纯水洗出残留物并定容至10mL，利用0.22μm孔径的水系滤膜过滤，取滤液即为产物；

其中，阳离子交换树脂柱和阴离子交换树脂柱的长度均为80cm、直径均为2.4cm、内装树脂质量均为300g；

步骤1)所述根际土壤是通过以下方法获得的：将栽培两个月的芦笋苗连根带土整体从钵中取出，去除根系外围土壤，而后将根系附着的土壤抖落，被抖落的土壤即为所述根际土壤；

所述阳离子交换树脂柱中的阳离子交换树脂，在使用前是通过以下步骤进行预处理的：用清水浸泡树脂24小时，再用清水冲洗树脂直至洗出液无杂质，去除液相组分，而后用树脂质量3倍、浓度为1M的盐酸溶液与树脂混合，搅拌2h，去除液相组分，加入60～70℃的水洗涤至中性；

所述阴离子交换树脂柱中的阴离子交换树脂，在使用前是通过以下步骤进行预处理的：用清水浸泡树脂24小时，再用清水冲洗树脂直至洗出液无杂质，去除液相组分，而后用树脂质量3倍、浓度为1M的氢氧化钠溶液与之混合，搅拌2h，去除液相组分，加入60～70℃的水洗涤至中性。

2.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于步骤1)所述密封是利用塑料薄膜封住瓶口。

3.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于步骤1)所得的滤液在执行步骤2)之前保存于无菌试剂瓶中。

4.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于还包括以下步骤4)：利用HPLC检测步骤3)所得滤液中有机酸类别和含量。

5.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于所述芦笋苗的品种是井冈701或井冈红。

6.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于获得根际土壤后在5min之内执行步骤1)。

7.根据权利要求1所述的一种芦笋根际土壤中有机酸的提取方法，其特征在于芦笋是通过以下方法栽培的：

A)催芽：取芦笋种子浸泡于次氯酸钠溶液中，搅拌，5分钟后用清水洗净；

B)浸种：在25～30℃温水中浸泡36～48h，每天换水2～3次；

C)将步骤B)浸种后的种子洗净，在培养皿中置于湿润滤纸的表面上，于25～30℃环境下催芽48～72h，每天清水冲洗1～2次；

D)将萌发的种子播入营养钵中，土与基质比例为3:1。