[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定野菊花中蒙花苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定野菊花中蒙花苷含量的方法。

背景技术

本品为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序。秋、冬二季花初开放时采摘，晒干，或蒸后晒干。本品呈类球形，直径0.3～1cm，棕黄色。总苞由4～5层苞片组成，外层苞片卵形或条形，外表面中部灰绿色或浅棕色，通常被白毛，边缘膜质；内层苞片长椭圆形，膜质，外表面无毛。总苞基部有的残留总花梗。舌状花1轮，黄色至棕黄色，皱缩卷曲；管状花多数，深黄色，体轻，气芳香，味苦。

药典中记载的提取方法为：取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈100ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用乙腈补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，并结合药典记录的测定方法进行测定。

上述野菊花中蒙花苷的含量的测定方法用时长，对操作人员要求高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种萃取迅速、检测精度高的ASE-HPLC法测定野菊花中蒙花苷含量的方法。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定野菊花中蒙花苷含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：将0.25g野菊花粉末与0.3g硅藻土混合均匀放入ASE萃取池；

步骤2：用甲醇萃取，并收集甲醇萃取液；

步骤3：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的蒙花苷的含量。

优选地，所述的步骤1依次包括下述步骤：

步骤S1：将野菊花粉碎，过三号筛，取0.25g与0.3g硅藻土混合均匀；

步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用甲醇萃取，并用甲醇定容至100ml，离心，取上清液。

优选地，步骤S2所述的ASE萃取池的体积为5ml。

优选地，步骤S3所述的离心参数为：速度为15000r/min，时间为5min。

优选地，步骤S3所述的萃取参数为：温度为100℃，萃取时间为7min，循环次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。

优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：

色谱柱：Thermo Syncronis C18；

柱温：40℃；

流速：0.5mL/min；

体积比等于26：24的甲醇：2％醋酸；

检测波长：334nm。

优选地，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1、蒙花苷为黄酮类化合物，黄酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、吡啶等溶剂，难溶于乙醚、三氯甲烷、苯等有机溶剂。查看相关文献，拟对80％甲醇、甲醇、乙醇进行提取溶剂的考察，评判的主要依据为提取率高低、杂质多少选出最佳溶剂。结果显示乙醇提取率最大，依次到甲醇、80％甲醇。乙醇提取的样品峰型差且杂质多。所以选择甲醇作为提取溶剂。

2、实验提取溶剂为甲醇，依据经验，采用萃取温度100℃、静态萃取时间7min，利用单因素考察了循环次数1次、2次、3次，结果表明循环2次已能提取完全，因此本发明的循环次数为2次。

附图说明

图1为以蒙花苷对照品的浓度(ng)-平均峰面积进行线性回归图；

图2为采用药典方法提取所得的样品色谱图；

图3为蒙花苷对照品色谱图；

图4为采用ASE法萃取所得的样品色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的权利要求书做进一步说明，下述的实施例仅为本发明的较佳实施例，并不构成对本发明的任何限制。在本发明权利要求书的保护范围所作出的任何修改、等同替换均属于本发明所要保护的范围内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、Thermo U3000UHPLC液相色谱仪、安捷伦1290高效液相色谱仪。

1.2试剂：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

甲醇(CH4O)：色谱纯；

冰醋酸(CH3COOH)：分析纯。

2、方法