[发明专利]枯草杆菌酶变体和编码它们的多核苷酸

权利要求书

1.一种用于获得一种蛋白酶变体的方法，该方法包括在亲本枯草杆菌酶的与具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的位置53、54、55、56以及57相对应的一个或多个位置引入缺失，其中该变体具有与SEQ ID NO:2至少65％一致的氨基酸序列；并且回收该变体。

2.如权利要求1所述的方法，其中该变体包含与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、55、56或57相对应的两个、三个、四个或五个缺失。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中通过一种方法获得该蛋白酶变体，该方法包括在亲本枯草杆菌酶的与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、55、56或57相对应的环中引入一个或多个选自下组的氨基酸的缺失，该组由Ser、Glu、Thr、Asn或Pro组成，其中该变体与SEQ ID NO 2具有至少65％的一致性。

4.如权利要求1所述的方法，其中通过一种方法获得该蛋白酶变体，该方法包括在亲本枯草杆菌酶的与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置55、56或57相对应的环中引入一个或多个氨基酸的缺失。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该蛋白酶变体与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽具有至少70％，例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或者至少99％、但小于100％的序列一致性。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中该亲本枯草杆菌酶是选自下组，该组由以下各项组成：

(a)与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽具有至少65％的序列一致性的一种多肽；

(b)由在中严谨度或高严谨度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)编码具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的一种序列、或者(iii)(i)或(ii)的全长互补体杂交的一种多核苷酸编码的一种多肽；

(c)由与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列或者编码具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的一种序列具有至少70％一致性的一种多核苷酸编码的一种多肽；以及

(d)具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的一个片段，该片段具有蛋白酶活性。

7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中该亲本枯草杆菌酶与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽具有至少65％，例如至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性。

8.一种蛋白酶变体，该蛋白酶变体在与具有SEQ ID NO:2的成熟多肽的位置53、54、55、56或57相对应的环中包含一个或多个氨基酸的缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、55、56或57相对应的位置进一步包含一个或多个取代，其中

(a)该变体与SEQ ID NO:2具有至少65％且小于100％的序列一致性，并且

(b)该变体具有蛋白酶活性。

9.如权利要求8所述的变体，其中该变体在与SEQ ID NO:2的位置53相对应的一个位置包含一个缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置54、55、56或57相对应的一个或多个位置进一步包含取代，和/或

其中该变体在与SEQ ID NO:2的位置54相对应的一个位置包含一个缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、55、56或57相对应的一个或多个位置进一步包含取代，和/或

其中该变体在与SEQ ID NO:2的位置55相对应的一个位置包含一个缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、56或57相对应的一个或多个位置进一步包含取代，和/或

其中该变体在与SEQ ID NO:2的位置56相对应的一个位置包含一个缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、55或57相对应的一个或多个位置进一步包含取代，或者

其中该变体在与SEQ ID NO:2的位置57相对应的一个位置包含一个缺失并且在与具有SEQ ID NO:2的该成熟多肽的位置53、54、55或56相对应的一个或多个位置进一步包含取代。