[发明专利]云南木鳖组织培养快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生物工程技术领域，具体涉及云南木鳖组织培养快速繁殖的方法。

背景技术

云南木鳖（Momordica dioica Roxb. ex Willd.），别名，木鳖子，该属植物药有45个种，云南有4种，为葫芦科苦瓜属多年生攀援草本植物。生于山坡、林缘，土层较深厚的地方，喜温暖潮湿的气候和向阳的环境。我国主要分布于湖北、广西、四川、云南等地。茎有纵棱，卷须粗壮，与叶对生，单一，不分枝。叶互生，圆形至阔卵形；花单性，雌雄同株；瓠果椭圆形，成熟后红色，肉质，呈龟板状，灰棕色。根系发达，具块状根，吸水吸肥能力强，既耐旱又耐湿。花期7～9月，果期8～11月。云南木鳖嫩叶可作菜，味清香、可口，并有清热解毒之功效，具有很高的食疗价值。成熟干燥种子和根入药，化学成分主要含木鳖子酸(momordic acid)、丝石竹皂甙元(gypsogenin)、齐墩果酸(oleanolic acid)、α-桐酸（α-木鳖子elaeostearic acid）、气基酸、甾醇，具有散结消肿、攻毒疗疮的功能。可用于治疗疮疡肿毒、乳痈、瘰疬、痔瘘、干癣、秃疮等症。迄今为止，国内外对于云南木鳖的研究较少，仅有其化学成分的相关分析报道。目前，云南木鳖的培育方法主要有扦插育苗和种子播种，扦插育苗伤口易腐烂、原材料浪费、增殖倍数低，难生根、成活率低；种子播种由于种子间差异大，导致种苗缺乏一致性和稳定性，更难以保持母株的优良性状。

发明内容

本发明提供了一种云南木鳖培养基组分简单、繁育操作简单、繁殖速度快，繁殖系数高，培育苗生长旺盛、生根多而粗壮、健壮的组织培养快速繁育木鳖子的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其包括以下步骤。

(1)外植体选择：选择生长健壮、无病虫害的幼嫩茎段，去除多余叶片，放入0.1%的洗衣粉或洗洁剂中浸泡3-5min，在自来水中冲洗10-15 min，用纯净水清洗1-2次。

(2)消毒处理：将外植本放入玻璃瓶中，置于超净工作台上，用浓度75%的酒精消毒30-40s，用无菌水冲洗1次，再置于0.08-0.1%氯化汞溶液中灭菌5-8 min，然后用无菌水冲洗5-6次，放在无菌过滤纸上吸干水分，备用。

(3)诱导培养：将处理好的外植体切成长2-3cm，带1-2节的茎段，接种于诱导培养基中培养，诱导培养基组分为：N₆+6-BA1.0-1.5mg/L+NAA0.05-0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，暗培养5-7d，光照强度为1600-1800lx，光照时间8-10h/d，培养温度（25±2℃），养时间50-60d，诱导大量的丛生芽。

(4)继代增殖培养：将丛生芽中的小芽长至4cm以上，切成带1-2节的茎段，接种于继代增殖培养基中培养，继代增殖培养基组分为：N₆+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L+马铃薯泥2-5%+活性炭1-2g /L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为1800-2000lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养15-20d，分化出丛生芽长2-3cm，培养时间60-70d，丛生芽长4-6cm。

(5)生根培养：将丛生芽小芽长至2cm以上，切成单株接种于生根培养基中培养，生根培养基组分为：N₆+6-BA0.3-0.6mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+香蕉泥5-10%+活性炭2-3g /L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为2000-2200lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养时间50-60d，获得带根茎叶完整小植株苗。

(6)炼苗与移栽：将株高3-5cm，根长2-4cm，生根数在3根以上时，置于自然光温室大棚苗床上炼苗15-20d后，取出生根苗，洗净根部的培养基，置于1000倍多菌灵溶液浸泡5-7 cm，捞出晾干至根发白，移栽于腐质土：火烧土：腐熟艾蒿体积比为5：3：2的混合基质中，荫蔽度80-85%，相对湿度70-80%，温度22-30℃，移栽10d后，用低浓度MS母液喷洒。

具体实施方式

(1)外植体选择：选择生长健壮、无病虫害的幼嫩茎段，去除多余叶片，放入0.1%的洗衣粉或洗洁剂中浸泡3-5min，在自来水中冲洗10-15 min，用纯净水清洗1-2次。