[发明专利]一种基于组织切片的三维模型的构建方法

权利要求书

1.一种基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

对组织进行连续切片，分成若干份，对所有的组织切片进行染色标记后，将所有组织切片完整贴到对应的载玻片上；或者：所有的组织切片自带荧光信号无需标记，将所有组织切片完整贴到对应的载玻片上；然后对扫描的组织切片图片根据载玻片编号对组织切片按顺序命名，使所有图片能按切片原始顺序排列，进行校准，对校准好的图片进行3D合成，获得所述基于组织切片的三维模型。

2.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述组织为实心组织或空心组织，所述实心组织为脑、肝、肾、甲状腺、胰腺、睾丸中的至少一种，所述空心组织为心、肺、食管、胃、肠、膀胱中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述若干份为6～96份。

4.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述染色标记为针对组织切片的各种染色标记，具体为免疫组织化学染色、苏木素-伊红染色、尼氏染色、胶原纤维染色、网状纤维染色、FJ染色、tunnel染色、DAPI染色。

5.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述“对所有的组织切片进行染色标记后，将所有组织切片完整贴到对应的载玻片上”包括以下步骤：将所有的组织切片分别转入对应的细胞培养板的小孔中；常温下，切片用PBS洗三次，每次五分钟；用浓度为0.3％的H₂O₂孵育30分钟；用PBS洗三次，每次五分钟；用浓度为0.5％的Triton孵育30分钟；在浓度为3％的BSA中孵育30分钟；在一抗中孵育24小时，温度为4℃；用PBS洗三次，每次五分钟；在生物素化的二抗中孵育2小时；用PBS洗三次，每次五分钟；在AB液中孵育2小时；用PBS洗三次，每次五分钟；在DAB试剂盒中孵育5分钟；用PBS洗三次，每次五分钟；贴片后水化、复染、分化、脱水、透明、封片、保存；

或，将所有的组织切片分别转入对应的细胞培养板的小孔中；常温下，切片用PBS洗三次，每次五分钟；用浓度为0.5％的Triton孵育30分钟；在浓度为3％的BSA中孵育30分钟；在一抗中孵育24小时，温度为4℃；用PBS洗三次，每次五分钟；在荧光二抗中孵育2小时；用PBS洗三次，每次五分钟；贴片、封片、保存；

或，针对石蜡切片组织，首先将石蜡切片贴到载玻片上，常温下向每张切片组织滴加100μl的0.3％H₂O₂孵育30分钟，PBS洗三次，每次5分钟，抗原修复后破膜，PBS洗三次，每次5分钟，然后用蒸馏水洗5分钟，待切片晾干后用免疫组化笔围绕组织画圈，晾2小时，常温下向上述圆圈内滴加100μl的3％胎牛血清孵育30分钟，甩掉封闭液，4℃下向圆圈内滴加100μl的一抗孵育24小时，PBS洗三次，每次5分钟；常温下向圆圈内滴加100μl生物素化的二抗孵育2小时，PBS洗三次，每次5分钟；常温下向圆圈内滴加100μl的AB液孵育2小时，PBS洗三次，每次5分钟；常温下向圆圈内滴加100μl的DAB染液反应5分钟，PBS洗三次，每次5分钟；将切片浸入自来水中，复染、分化、脱水、透明、封片、保存。

6.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述“所有的组织切片自带荧光信号无需标记，将所有组织切片完整贴到对应的载玻片上”包括以下步骤：将所有组织切片分别转入对应的细胞培养板的小孔中，将所有组织切片清洗后进行贴片，然后封片、保存。

7.根据权利要求5或6所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述贴片包括以下步骤：将细胞培养板每孔中的切片贴到对应的明胶包被好的载玻片上，并将载玻片做好标记，贴片时选用直径为2-5mm的画眉笔，贴好的切片保持其自然形态。

8.根据权利要求1所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述校准是以其中一张图片为基准作为基准图片，对所有相邻的切片图片进行位置/角度的校准。

9.根据权利要求8所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述对所有相邻的切片图片进行位置/角度的校准是以基准图片为标准校准下一张图片，之后再以下一张图片为标准校准相邻的下一张图片，按此原则直到所有的图片校准完成。

10.根据权利要求9所述的基于组织切片的三维模型的构建方法，其特征在于：所述基准图片的选择是以保证基准图片大小能容纳所有图片为原则。