[发明专利]一种16,17开环孕甾烷糖苷化合物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一个新的16,17开环孕甾烷糖苷化合物及其在制备免疫抑制药物中的应用，特别是在制备治疗器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的免疫药物中的应用。

背景技术

免疫应答反应本是机体自我保护、自身稳定的一种防御反应，长期抑制这种反应会带来感染和诱发肿瘤等一些严重的后果,这也是目前免疫抑制剂所遇到的一些问题。免疫抑制剂在临床为自身免疫病和器官移植后的排斥反应提供了有效的治疗药物，通常用来抑制器官移植后出现的排异反应，治疗骨髓移植后出现的移植物抗宿主病，或治疗类风湿性关节炎、克隆氏症等自身免疫性疾病，一般会通过药物进行免疫抑制。自身免疫性疾病大多为慢性或进行性疾病需要长期用药，而现有的糖皮质激素(如地塞米松)和免疫抑制剂长期用药普遍存在毒副作用大、使用不方便等缺点，如地塞米松等糖皮质激素类药物、氯霉素类药物、四环素类药物和磺胺类药物等常可导致机体免疫抑制。因此，迫切需要研制一类高效低毒的新型免疫抑制剂，相比于化学治疗，中药作为一种天然产物，具有与人组织相容性质好、副作用小等优点，在免疫抑制剂的研究中越来越受到人们的重视。

思茅藤(Epigynum auritum)是夹竹桃科思茅藤族思茅藤属的一个种，产于云南南部，根据我们前期的研究结果，思茅藤中含有较多结构新颖雄甾烷、C₂₁甾体及其糖苷类化合物。在发现新药先导化合物的兴趣驱动下，我们对这些新化合物进行了大量的生物活性筛选实验，本发明提供的16,17开环孕甾烷糖苷化合物及其作为免疫抑制药物目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供式Ⅰ所示的孕甾烷糖苷化合物，其为具有药用价值的16,17开环孕甾烷糖苷化合物：

式Ⅰ：16-acetyl pregn-5-ene-20-one-17-ol-3-O-2′-methoxy-6-deoxy-β-D-idopyranose；

Epigynoside D，中文名为16-乙酰基-17-羟基-孕甾烷-5(6)-烯-20-酮3-O-2′-甲氧基-6′-去氧-β-D-艾杜糖苷，俗名为思茅藤苷丁。

本发明的另一目的是将上述思茅藤孕甾烷糖苷类化合物应用在制备免疫抑制药物中。

具体是免疫抑制药物应用在制备自身免疫性疾病的治疗药物中，或应用在制备器官移植抗排斥反应的治疗药物中。

本发明所述应用中还可以加入一种或多种药物上可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等，必要时还可加入香味剂、色素和甜味剂等。

本发明所述应用除制成胶囊外，还可以制成丸剂、粉剂、片剂、粒剂、口服液和注射液等多种形式。

本发明中用健康的Balb/c小鼠来制备脾细胞用于试验。脾细胞制备完成后，通过ConA或者LPS进行诱导，同时在试验组加入不同浓度供试化合物，培养72h后，通过CCK-8试剂法分别测定试验组、诱导对照组和未诱导对照组的吸光值，从而评价化合物刺激T细胞或者B细胞增殖的能力；实验结果表明本发明中涉及的孕甾烷糖苷化合物，思茅藤苷丁(epigynoside D)对ConA(伴刀豆蛋白)刺激的Balb/c小鼠脾淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，与不加该化合物的对照组相比有显著性差异(p<0.05)。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的内容并不局限于此，本实施例中方法如无特殊说明的均按常规方法操作，所用试剂如无特殊说明的采用常规市售试剂或按常规方法配置的试剂。

实施例1：思茅藤苷丁的制备

取风干后的11kg思茅藤茎样品，粉碎后用甲醇回流提取3次，回收溶剂，浓缩至小体积，再用乙酸乙酯萃取3次，浓缩乙酸乙酯层，称重得110g；将乙酸乙酯层部分用大孔吸附树脂D101进行粗分，分别用体积百分比40％、60％、80％、100％的甲醇水溶液进行洗脱总共得到4个部分(Fr.A、Fr.B、Fr.C、Fr.D)。Fr.C(25.7g)通过C18中压柱以体积百分比20％-70％甲醇水溶液进行梯度洗脱得到四个部分Fr.C1-C4。Fr.C2(1.2g)通过Sephadex LH-20(流动相为氯仿：甲醇＝1:1)洗脱，紧接着再通过C18中压柱和半制备液相制备得到式Ⅰ的思茅藤苷丁(9.6mg)。经鉴定，式Ⅰ中的化合物为新化合物。

鉴定结果如下：