[发明专利]基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系

权利要求书

1.一种基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，利用SiO₂@Ag复合微球和Ag膜，其特征在于：同时采用SiO₂@Ag复合微球和Ag纳米薄膜增强荧光分子信号，将SiO₂@Ag复合微球作为手柄，在SiO₂微球上面负载Ag纳米颗粒，用光镊系统操控SiO₂@Ag复合微球，捕获激光为975nm的远红外激光，荧光部分使用532nm的激发光，主动寻找待测荧光分子，进行特定位置的扫描分析和实时监测；

所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系的构建方法采用三明治结构，以上、下玻璃片作为上、下基片，从上到下依次是：上基片、Ag纳米薄膜、聚电解质层（PE层）、荧光分子层、下基片；用包括双面胶将两块基片粘在一起，中间是SiO₂@Ag复合微球溶液的三明治结构。

2.根据权利要求1所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于：所述的光镊系统为Thorlabs系统。

3.一种根据权利要求1所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于：所述的SiO₂@Ag复合微球溶液是20μL，用双面胶和凡士林封在上下基片间。

4.根据权利要求1所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于：所述的上基片上直接负载一层单层Ag纳米薄膜，具体操作是：于烧杯中加入12mL Ag溶胶、6mL环己烷、5mL无水乙醇，接着除去大部分环己烷，用干净的玻片捞起Ag纳米薄膜，晾干得载有Ag纳米薄膜基片。

5.根据权利要求4所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于：在所述的Ag纳米薄膜上负载聚电解质层，步骤为：

(1) 载有Ag纳米薄膜基片浸入1mol/L NaCl 溶液配制的0.003mol/L PDDA溶液中，10min后取出，去离子水冲洗该基片表面数次；

(2)将载有Ag纳米薄膜基片浸入1mol/L NaCl 溶液配制的0.003mol/L PSS溶液中，10min后取出，去离子水冲洗该基片表面数；

（3）重复（1）、（2）两次，再重复（1）一次，Ag纳米薄膜表面共吸附了7层聚电解质单层，即依次是PDDA、PSS、PDDA、PSS、PDDA、PSS、PDDA层，共3.5个双层的聚电解质层。

6.根据权利要求5所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于：在所述的聚电解质层上负载荧光分子，方法是：将吸附了聚电解质层的Ag纳米薄膜基片浸入2.5×10^-5 mol/L表面带正电荷的阴离子型的带负电荷Cy3荧光分子溶液中30min，去离子水冲洗多次，N₂吹干。

7.根据权利要求1所述的基于光镊与表面增强荧光技术相结合的检测体系，其特征在于，所述SiO₂@Ag复合微球溶液的制备：

1）化学还原法制备Ag纳米颗粒：500mL烧杯中，加入0.0600g AgNO₃、300mL去离子水、沸腾后加入6mL1%柠檬酸三钠溶液，即0.0600g 柠檬酸三钠溶于6mL去离子水中的1%柠檬酸三钠溶液，加热沸腾1h，冷却后，离心水洗3次，得表面带负电荷的Ag纳米颗粒备用；

2）SiO₂微球的烷基化：使用硅烷偶联剂APTMS对SiO₂微球进行烷基化，使其表面带上正电荷，具体操作：4m离心管中，依次加入 150μL、4μm的胺基SiO₂微球、1.3mL无水乙醇、1.5μLAPTMS，40℃、200r/min摇床反应6小时，结束后离心，先用无水乙醇洗6次，再水洗3次，加入去离子水，得表面带正电荷SiO₂微球备用；

3）SiO₂@Ag复合微球的制备：烷基化后的SiO₂微球表面带正电荷，而制备的Ag纳米颗粒表面带负电荷，设置不同比例的SiO₂:AgNPs，混合后，室温、70 r/min摇床反应5min，离心水洗3次，加入去离子水得SiO₂@Ag复合微球溶液。