[发明专利]超载和洗脱层析

权利要求书

1.用于从包含抗体和一种或多种污染物的组合物中纯化抗体的方法，所述方法包括

a)以超过层析材料对于抗体的动态结合容量使用装载缓冲液将组合物装载到混合模式材料、离子交换材料、疏水性相互作用材料，或亲和材料，其中层析材料对抗体的分配系数大于30，其中装载密度在200g/L至1500g/L之间，

b)使用洗脱缓冲液在一种或多种污染物仍然与层析材料结合的条件下，从层析材料上洗脱抗体，其中洗脱缓冲液具有小于装载缓冲液的电导率的电导率，和

c)混合包含步骤a)和b)的层析流出液中的抗体的级分。

2.权利要求1的方法，其中抗体是单克隆抗体。

3.权利要求2的方法，其中单克隆抗体是嵌合抗体、人源化抗体，或人抗体。

4.权利要求1的方法，其中抗体是抗原结合片段，任选地，其中所述抗原结合片段是Fab片段、Fab’片段、F(ab’)₂片段、scFv、di-scFv、bi-scFv、串联(di,tri)-scFv、Fv、sdAb。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中至少一种污染物是中华仓鼠卵巢蛋白(CHOP)、宿主细胞蛋白(HCP)、泄露的蛋白A、核酸、聚集的蛋白质、细胞培养基组分、庆大霉素、多肽片段、内毒素和病毒性污染物中的任何一种或多种。

6.权利要求5的方法，其中所述核酸是DNA。

7.权利要求1-4中任一项的方法，其中离子交换材料是阳离子交换材料或者阴离子交换材料。

8.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述层析材料是树脂。

9.权利要求1-4中任一项的方法，其中以约层析材料对于一种或多种污染物的动态结合容量将组合物装载到层析材料上。

10.权利要求1-4中任一项的方法，其中装载缓冲液具有4.0mS/cm至7.0mS/cm的电导率，并且洗脱缓冲液具有0.0mS/cm至7.0mS/cm的电导率。

11.权利要求1-4中任一项的方法，其中洗脱缓冲液具有小于装载缓冲液的pH的pH。

12.权利要求11的方法，其中装载缓冲液具有4至9的pH并且洗脱缓冲液具有4至9的pH。

13.权利要求1-4中任一项的方法，其中洗脱缓冲液具有大于装载缓冲液的pH的pH。

14.权利要求13的方法，其中装载缓冲液具有4至9的pH和洗脱缓冲液具有4至9的pH。

15.权利要求1-4中任一项的方法，其中组合物是来自亲和层析、阳离子交换层析、阴离子交换层析、混合模式层析或疏水性相互作用层析的洗出液。

16.权利要求15的方法，其中亲和层析是蛋白A层析。