[发明专利]一种基于液体活检的非小细胞肺癌检测的试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于液体活检的非小细胞肺癌检测的试剂盒，包括：用于增强染色效果的染色增强液和带荧光染色标记的特异性配体；其中所述特异性配体包括：EGFR抗体、CD45抗体和叶酸配体；所述染色增强液包括浓度为0.001～1mg/mL的表面活性剂。本发明的试剂盒，可以有效的富集目标细胞，并且确认富集的目标细胞是否来源于非小细胞肺癌的早期患者。同时，通过双瘤标检测增加CTC检测的灵敏度，并且进一步通过CEP8的检测保证检测的准确性。而且通过染色增强液加强染色效果，使多种带荧光染色标记的配体都可以与目标细胞表面结合，对目标细胞表面染色，染色效果更好，荧光更强，而且边界清晰。

技术领域

本发明涉及液体活检领域，具体地说是一种基于液体活检的非小细胞肺癌检测的试剂盒。

背景技术

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率和死亡率均位于首位。肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)，其中非小细胞肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌。与SCLC相比，虽然NSCLC细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚，但是因其约占所有肺癌的80％，而且约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低，所以围绕NSCLC的研究众多，也得到了更多人的关注和重视。基于NSCLC的上述特点，其早期筛查与诊断显得尤为重要，有效的早期筛查和诊断对于提高患者生存率和降低患者复发率都具有重要的作用。

目前，针对NSCLC的早期筛查，基于液体活检检测循环肿瘤细胞(CTC)的方法具有众多传统检测方法所没有的优势，例如无创、快捷、准确率高等优点。CTC是一种自发或因诊疗操作由实体瘤原发灶或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。由于转移是癌症相关死亡的主要原因，而CTC被视为转移的种子，因此对CTC的检测在新的肿瘤生物标志物的发现、肿瘤预后判断及个体化治疗领域存在很大的应用潜力，是国内外肿瘤研究的热点之一。然而现有的CTC检测的应用主要在检测癌症转移复发上，对于癌症的早期检测研究较少。其实，CTC在癌症的早期检测中也具有重要价值，研究表明肿瘤在1mm时，血液中即可检出CTC，通过检测外周血循环中CTC的存在，可以在癌症的早期发现癌症。为此，有效的CTC捕获、富集分析方法对于基于CTC的早筛很重要。

目前为止，基于EpCAM的CTC捕获、富集分析平台仍然被作为转移肿瘤中CTC检测的金标准，但是该方法是否适合用于肿瘤的早期检测仍存在争议。而且NSCLC患者的CTC往往表现出非上皮的特征，以广谱的上皮粘附分子EpCAM为生物标志物对于非小细胞肺癌的CTC的检测存在很高的假阴性，同时该标志物不具有组织特异性，无法追溯CTC的具体组织来源，而这一点对于后续的肿瘤治疗具有重要意义。因此，发现并应用一些NSCLC组织特异性的生物标志物进行CTC的检测分析显得尤为重要。

叶酸受体(FR)虽然在很多肿瘤组织中都有表达，但是其在NSCLC中呈现出明显的高表达，72-83％的NSCLC患者都表现为FR高表达，而它在正常组织表达量较低。因此，基于FR的CTC检测具有很高的NSCLC早期诊断价值。此外，表皮生长因子受体(EGFR)也是一种重要的非小细胞肺癌预测标志物，其在转移的NSCLC中阳性率为45-71％，而且在NSCLC中EGFR会发生过表达、拷贝数变异或活化突变，与NSCLC的耐药性和预后关系密切，因此EGFR也被广泛用做NSCLC诊断预测和预后的生物标志物。

据此，虽然FR或EGFR对于NSCLC来源的CTC的检测率比较高，但是单独使用FR或EGFR作为CTC检测的标志物都会存在一定程度阴性率，造成漏检。因此，可以联合FR和EGFR两种生物标志物作为检测NSCLC的CTC早期筛查的生物标志物，不仅具有更高的灵敏性，而且还可以根据FR对CTC进行溯源分析。在对NSCLC做早期筛查的同时，还可以根据EGFR的状态指导用药并预测预后。