[发明专利]一种从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫的方法

说明书

本发明公开了一种从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫的方法，步骤为：将收集的大便离心收集沉淀；采用生理盐水或双蒸水混匀沉淀，离心到混合液澄清为止，再离心收集沉淀；将沉淀滴加在与烧杯直径等宽的滤纸中部，将滤纸一端固定在烧杯口上方，然后将另一端放入烧杯中；再将生理盐水或双蒸水沿烧杯壁加入至烧杯中至距离滤纸底部0.5～1cm，室温放置3～12小时，收集烧杯中的液体重复离心，保存沉淀，即得。本发明的收集方法采用了离淘滤法，可以获得没有杂质的粪类圆线虫幼虫，区别于蠕虫幼虫收集常用方法贝尔曼氏法、平皿法和Koga法方法，且可以用于这三种方法去除杂质的后续工作，方便后续DNA、RNA和蛋白质的提取等研究。

技术领域

本发明属于病原生物学技术领域，具体地说，本发明涉及一种从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫的方法，用于后续分子生物学等的研究。

背景技术

粪类圆线虫(Strongyloides stercoralis)是一种兼性寄生虫，可以引起人兽共患寄生虫病，并可在宿主体内自体感染、播散性超度感染。粪类圆线虫可怕之处是其具有机会致病性，并可自体感染和播散性超度感染。患者免疫力正常时，该虫引起的临床症状轻，易被忽略导致误诊、漏诊。一旦患者免疫力下降或受损，该虫大量增殖，可导致患者全身播散性感染，造成全身各器官衰竭，甚至死亡。更可怕的是基层医院检验医生和临床医生对其知之甚少以及医院所用病原学检验方法检出率有限。就第一次全国人体寄生虫分布调查报告显示海南省居民粪类圆线虫感染率居全国之首，感染率在1.091％。

蠕虫幼虫收集常用方法有贝尔曼氏法、平皿法、Koga法等方法，其中贝尔曼氏法和Koga法适用于粪类圆线虫幼虫收集。这几种方法主要用于从成形粪便中收集幼虫的病原学检测，不适合用于从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫，其次它们的收集物中有杂质，不利于开展后续粪类圆线虫幼虫DNA和RNA的提取等研究。因此，分子生物学实验研究和/或临床检验需要有新的简易的检出率高的从患者水样粪便中收集无杂质的粪类圆线虫的方法。

发明内容

基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫的方法。

为了实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：

一种从水样粪便中收集粪类圆线虫幼虫的方法，包括以下步骤：

(1)、将收集的大便于500rpm-3000rpm离心5～10分钟，收集沉淀；

(2)、采用生理盐水或双蒸水混匀步骤(1)沉淀，500rpm-3000rpm离心5～10分钟，弃上清，重复此步骤到混合液澄清为止，再于500rpm-3000rpm离心5～10分钟，收集沉淀；

(3)、用少许生理盐水或双蒸水混匀步骤(2)沉淀，将沉淀滴加在与烧杯等宽的滤纸中部，将滤纸一端固定在烧杯口上方，然后将另一端放入烧杯中；再将生理盐水或双蒸水沿烧杯壁加入至烧杯中至距离滤纸底部0.5～1cm，室温放置3～12小时，收集烧杯中的液体于500rpm-3000rpm离心5～10分钟，收集沉淀；采用双蒸水混匀沉淀，500rpm-3000rpm离心5～10分钟，重复此步骤2～3次，保存沉淀，即得。

在其中一些实施例中，步骤(1)-(3)中所述离心的速度为2000rpm。

在其中一些实施例中，步骤(3)中所述烧杯的容量为100ml、250ml或500ml，烧杯的容量是根据涂于滤纸上的步骤(2)的沉淀量而确定的，如果量多，那就选择大容量的烧杯，如果量少，就选择小容量的烧杯。

在其中一些实施例中，所述滤纸的性状为T型或者长方形，T型滤纸容易在杯口固定，长方形滤纸可借助其他固定物在杯口固定，其他形状的滤纸不易固定在杯口。