[发明专利]一种基于聚集诱导发光原理用于选择性检测半胱氨酸的荧光试剂的合成及应用

权利要求书

1.一种选择性检测半胱氨酸的荧光试剂，其特征在于：所述选择性检测半胱氨酸的荧光试剂具有如下结构：

2.根据权利要求1所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂，其特征在于：含有四苯乙烯结构作为荧光信号基团。

3.根据权利要求1所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂，其特征在于：含有2,4-二硝基苯磺酰基结构作为荧光猝灭基团和巯基响应基团。

4.根据权利要求1所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂的合成方法，其特征在于：包括如下步骤：

第一步：二苯甲酮在四氯化钛和锌粉的作用下发生McMurry反应，生成具有聚集诱导发光特性的化合物1；

第二步：化合物1在醋酸，硝酸的作用下发生硝化反应，生成化合物2；

第三步：化合物2在Pd/C催化下被水合肼还原为TPENH₂；

第四步：化合物TPENH₂与2,4-二硝基苯磺酰氯在碳酸钾作用下发生反应，生成目标化合物TPENNO₂，利用柱层析提纯后，目标化合物TPENNO₂的结构经¹HNMR、¹³CNMR和高分辨质谱鉴定。

5.根据权利要求3所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂的合成方法，其特征在于：包括如下步骤：

第一步：二苯甲酮和锌粉加到四氢呋喃中，搅拌下冷却到-20℃后半小时，然后缓慢滴入四氯化钛，在-20℃继续搅拌半小时后，缓慢升至室温，然后加热回流过夜，冷却，过滤，浓缩后利用柱层析法分离纯化，得到具有聚集诱导发光特性的化合物1；

第二步：将化合物1加入醋酸和二氯甲烷中，冷却到-20℃后，将65％的浓硝酸加到反应液中，在-20℃继续搅拌15min后，加入冷水分液萃取，有机相用水洗涤三次，干燥浓缩，残余物用甲醇重结晶得黄色固体化合物2；

第三步：将化合物2、Pd/C加到乙醇中，室温下搅拌15min，将85％的水合肼加入反应液中回流4h，冷却后抽滤，滤液浓缩后用甲醇重结晶得还原产物TPENH₂；

第四步：将化合物TPENH₂、碳酸钾加入乙腈中，冷却至0℃，之后分批加入2,4-二硝基苯磺酰氯发生反应，生成目标化合物TPENNO₂；经柱层析提纯后，目标化合物TPENNO₂的结构经¹HNMR、¹³CNMR和高分辨质谱鉴定。

6.根据权利要求1所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂的应用方法，其特征在于：可选择性检测半胱氨酸。

7.根据权利要求1所述的选择性检测半胱氨酸的荧光试剂的应用方法，其特征在于：可用于细胞内巯基化合物的检测。