[发明专利]一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器

说明书

技术领域

本发明属于干细胞领域，具体涉及一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器。

背景技术

肺癌是目前对人类的健康和生命危害最大的恶性肿瘤之一。迄今为止，现有的肺癌治疗方法仅可延长患者的生存期，改善其生活质量，几乎所有的患者最终仍死于原发病。近年来有学者提出，在肿瘤组织中存在极小一部分具备无限增殖潜能和自我更新能力的干细胞群体，对肿瘤的发生、发展起着至关重要的作用，针对这部分细胞的靶向治疗将会给肿瘤治疗带来深远影响。但由于肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在肿瘤组织中的含量极少，这成为制约CSCs研究发展的主要障碍。因此，建立一种高效的富集CSCs方法，对后续实验研究的顺利进行非常必要，也是目前CSCs领域研究的重要课题之一。

当前肺癌干细胞研究的焦点是分离和鉴定肺癌干细胞，一般采用流式细胞仪分选可能的肺癌细胞亚群，再进行生物学鉴定，以证明其干细胞特性。但由于缺乏特异性的干细胞筛选的分子标志，筛选结果争议较大。肿瘤干细胞标志物是一些在肿瘤干细胞中特异性高表达(阳性表达)、不表达或低表达(阴性表达)的分子。国外一些学者通过研究报道，CD133(+)/nestin(+)可能为肺癌干细胞的标记物。研究过程中，可以按照肿瘤干细胞具有能在无血清悬浮培养条件下富集的特性，采用添加生长因子的无血清培养基对肺癌细胞进行悬浮培养，获得肺癌细胞球体，然后对分离到的肺癌细胞球体进行生物学功能鉴定。

目前，在实际的动物细胞培养过程中，血清是最为常用和基本的添加物。无血清培养基则可以在不添加血清的条件下即为细胞的体外生长和繁殖提供良好的条件。从原代肿瘤中获取肿瘤细胞，在含有适当生长因子(如碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子等)的无血清培养基中培养，非肿瘤干细胞由于“血清饥饿”，将无法正常存活，但肿瘤干细胞却可以存活并繁殖，由此肿瘤细胞将得到纯化并维持干细胞状态，其得率也将提高，更好进行各项研究。无血清培养具有实用、简单、快捷等诸多优点，可快速获得足够数量的干细胞。

以陈平等人的研究为例(肺癌干细胞富集及相关标志物的表达，中国组织工程研究第19卷第14期)，使用含有表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子1以及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基对SPCA-1肺癌细胞诱导培养5-10d可获得悬浮生长细胞球体。RT-PCR检测肺球体细胞，除表达肺癌干细胞标志CD24和CD221外，还表达细支气管肺泡干细胞标志CCSP和SP-C，此外，肺球体细胞表达胚胎干细胞的主干基因OCT4、Nanog、Bmi-1和肺干细胞的主干基因TTF-1。

上述方法确实可以有效获得肺癌干细胞，但是培养过程较为繁琐且诱导效率较低，需要培养5-10d才可获得悬浮生长细胞球体，且在球体形成之前每隔2d就需要添加一次生长因子。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高肺癌干细胞富集效率的细胞培养容器，以高效、快捷获取悬浮生长细胞球体及肺癌干细胞，提高科研效率。

上述目的是通过如下技术方案实现的：

一种提高肺癌干细胞富集效率的培养容器，包括培养容器主体，培养容器主体内壁还设有包被层，包被层为γ聚谷氨酸材质。

优选地，所述γ聚谷氨酸分子量为70万克/摩尔。

优选地，所述培养容器为培养瓶。

更优选地，培养瓶规格为25cm²、75cm²、175cm²。

优选地，所述培养容器为培养皿。

更优选地，培养皿规格为35mm、60mm、100mm。

优选地，所述培养容器为培养板。

更优选地，培养板规格为6孔、12孔、24孔。

一种制备上述培养容器的方法，包括如下步骤：

步骤S1，将无菌γ聚谷氨酸溶于无菌水中，制成浓度为0.1-0.2mg/mL的γ聚谷氨酸溶液，用0.22μm滤膜过滤，备用；

步骤S2，取上述γ聚谷氨酸溶液加入培养容器中，充分摇匀使其均匀铺满于整个细胞培养容器的底部，放入37℃培养箱中静置4-6小时；

步骤S3，从培养箱中取出培养器皿，用无菌水清洗2-3次，置于37℃培养箱备用。

本发明的有益效果：

本发明提供的含有γ聚谷氨酸包被层的培养容器可以显著提高悬浮生长细胞球体的形成效率，24小时内即可形成理想的悬浮生长细胞球体，且肺癌干细胞在该悬浮生长细胞球体中高度富集，比现有的无血清培养基加细胞生长因子法效率更高，更便捷。

附图说明