[发明专利]辅助鉴定牡丹品种‘凤丹’籽粒脂肪酸合成的专用引物

说明书

本发明提供一对辅助鉴定牡丹品种‘凤丹’籽粒脂肪酸合成的专用引物，属于分子生物学领域，本发明还提供牡丹品种‘凤丹’的油体蛋白基因PsOLE1的cDNA序列SEQ NO.1及其克隆方法，并提供了克隆所用的兼并引物和RACE扩增引物；同时提供了牡丹品种‘凤丹’的油体蛋白基因的实时定量引物，利用所述牡丹品种‘凤丹’的油体蛋白基因的实时定量引物进行实时定量PCR扩增，辅助快速检测牡丹品种‘凤丹’脂肪酸合成进程的方法，可以利用所述的油体蛋白基因指导牡丹品种‘凤丹’籽粒收获时间，与传统GC‑MS技术测定脂肪酸含量相比，该检测方便快捷，大大的节约了测定成本，从而为牡丹籽粒的收获时间提供科学的辅助工具。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一个牡丹品种‘凤丹’的油体蛋白基因PsOLE1的克隆和一对可以辅助鉴定牡丹品种‘凤丹’籽粒脂肪酸合成的专用引物。

背景技术

牡丹具有很高的观赏价值和药用价值。以牡丹籽仁为原料提炼出的籽油通过了毒理学安全性评价，于2011年3月22日被卫生部批准为新资源食品，使牡丹籽油跻身进入食用油行列，牡丹籽油产业迅猛发展，全国油用牡丹产业发展的热潮正在到来。而牡丹作为新兴的油料作物，其资源的开发和利用都处于起步阶段，相关基础研究十分薄弱。王亮生课题组将油用牡丹品种‘凤丹’从每年5月份授粉后开始计算每隔10天取材，人为分成了S1-S10，其中S1-S3是种子发育初期，S3-S9是快速生长期，S9-S10是籽粒成熟期。利用GC-MS技术测定了籽粒授粉后成熟进程中的脂肪酸含量，发现脂肪酸含量到S9达到最高值，之后(S9-S10)下降。

Vance和Huang最早从芥菜中发现油质蛋白，Oleosin蛋白不但广泛存在于油料作物种子中，在非油料作物中也存在，如胡萝卜、大麦、苔藓类等植物。OLE基因已经从很多物种中克隆出来，如拟南芥、油菜、玉米、芝麻、水稻、咖啡、大豆、大麦、橄榄、麻风树等。OLE基因存在形式为家族式，其表达具有经典的“时、空”特点。牡丹中的油体蛋白基因到目前为止尚未得知，其与牡丹脂肪酸合成进程是否存在相关关系，其是否能辅助牡丹籽粒的收获等是本次发明的主要内容。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一个牡丹油体蛋白基因PsOLE1的cDNA序列和一对可以辅助鉴定牡丹品种‘凤丹’籽粒脂肪酸合成的的专用引物。这对引物扩增的产物与籽粒脂肪酸含量具有极显著的正相关，因此可以为牡丹籽粒的收获时间提供指导。

本发明是按如下技术方案实现的：

牡丹品种‘凤丹’的油体蛋白基因PsOLE1的cDNA序列，所述的基因序列为：