[发明专利]一种环糊精包合多价特异性猪转移因子制备方法

说明书

技术领域

本发明属于转移因子制备技术领域，涉及一种环糊精包合多价特异性猪转 移因子制备方法。

背景技术

畜禽病毒性疾病严重地威胁着广大养殖户甚至整个国民经济的发展，我国 每年因畜禽病毒感染造成的损失可达数百亿元，提高动物自身免疫力是解决动 物病毒感染的一个主要途径，在增强动物机体免疫力的药物中，转移因子经受 了长时间的检验，是具有广泛代表性的药品之一，目前，现有转移因子存在有 效成分低，口服时容易被胃酸破坏的技术问题。

发明内容

本发明提出一种环糊精包合多价特异性猪转移因子制备方法，解决了上述 技术问题。

本发明的技术方案是这样实现的，包含以下步骤：

(1)原材料的制备：选健康无病史且予以免疫增强处理的猪宰杀，取脾脏 于冰上，冷冻保存；

(2)预处理：称量猪脾后，用冷三蒸水洗净猪脾，剪去其筋膜及脂肪组织， 再用冷三蒸水洗涤干净；

(3)破碎：将洗干净的猪脾脏剪碎，加入冷的生理盐水，用高速组织捣碎 机破碎，制得匀浆液；

(4)冻融：将匀浆液置于冷冻后再融化，进行若干次交替冻融；

(5)提取：加入冷生理盐水，置于冰冻离心机中进行离心分离，取上层血 红色液体，再用漏斗过滤，取滤液；

(6)超滤：将步骤(5)中的滤液用中空纤维管加压超滤，得到滤液；

(7)除菌：将步骤(6)中超滤得到的滤液用滤膜加压过滤除菌，得到猪 转移因子；

(8)包合：将羟丙基-β-环糊精和猪转移因子按5:1的比例恒温30℃条件下 搅拌2小时进行包合；

(9)分装，冻干，即得包合动物用转移因子粉剂。

进一步，本发明的更优方案为：所述步骤(1)中，对供脾猪在取脾前予以 特异的免疫增强处理，给仔猪免疫一组包含若干类畜禽病原微生物抗原表位的 多肽类组合抗原，使制备的转移因子既具有增强非特异性免疫的功能也具有提 高特异性抗病原微生物的功能。

进一步，所述步骤(1)中所宰杀猪具体为6月龄猪，冷冻温度为－20℃。

进一步，冷的生理盐水的加入体积为猪脾脏体积的2倍份，高速组织捣碎 机破碎工艺具体为采用在冰冻的条件下以1000rpm捣碎3次，每次3min

进一步，所述步骤(4)中，冷冻温度具体为－80℃，融化方式和温度具体 为水浴30℃，交替冻融次数具体为10次。

进一步，所述步骤(5)中，加入冷生理盐水的体积具体为物料体积的3倍， 冰冻离心机的离心工艺具体为在5℃以4000rpm离心30分钟，过滤漏斗具体为 G2砂心漏斗。

进一步，所述步骤(6)中，中空纤维管具体为截流值为6000道尔顿的中 空纤维管，得到的滤液具体为分子量小于6000道尔顿的转移因子。

进一步，所述步骤(7)中，滤膜孔径具体为0.22μm。

本发明原理及有益效果为：

1、本发明是经羟丙基-β-环糊精包合后的转移因子粉剂，使转移因子的运输、 保存和使用更加方便，另外转移因子粉剂添加到饲料中或溶解到水中饮用均可， 应用前景广泛。

2、利用羟丙基-β-环糊精包合转移因子是长久以来未解决的技术问题，因为 一般会降低转移因子的有效成分，本发明经过了大量的实验研究，得到了有效 成分较高的羟丙基-β-环糊精包合转移因子，本发明还将在这种研究基础上扩大 包合物，使产品的抗病毒效果更加突出，经包合后的转移因子口服时不易被胃 酸破坏，原有性质不变，还能提高生物利用度，使转移因子在胃液中仍能保持 较高的有效成分，同时转移因子无毒副作用，使用剂量小，本发明转移因子确 定动物合适用量为0.2mg/kg。

3、本发明中，羟丙基-β-环糊精是β-环糊精的一种羟烷基化衍生物，是一种 水溶性的、非还原性的、不易被酸水解的白色结晶性粉末，其分子结构独特， 具有分子胶囊结构，药物进入其中间的空筒结构所形成的包合物仍保留原来的 化学性质，经渗透、扩散作用，包合物中的药物被溶出而发挥药效。

4、本发明中，采用冷冻干燥法，搅拌使转移因子达到最佳包合，通过大量 试验及分析可知，转移因子和羟丙基-β-环糊精比例为1:5，包合温度为30℃，包 合时间为2小时，使药物具有较高的稳定性。

5、本发明可以使生物对药物的吸收显著增加，并能减轻对胃肠或肌肉组织 的损伤，转移因子经羟丙基-β-环糊精包合后，不但溶解度高，释放速度快，而 且与未经包合的转移因子相比，血液中的药物浓度水平明显提高。