[发明专利]东方铃蟾生物活性肽、基因及其在制药中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种东方铃蟾(Bombina orientalis)生物活性肽Bombinin-8及其基因和在制药中的应用，属于生物医学领域。

背景技术

恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病。传统的化学治疗虽然能抑制恶性肿瘤的发展，但在化疗过程中使用的抗肿瘤药物，在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有较大的杀伤性毒副作用。在临床使用中，还可能产生肿瘤耐药性现象。因此，研究高效、低毒的新型抗肿瘤药物，已经成为当今肿瘤治疗中一个亟待解决的重要问题。肝癌是世界十大恶性肿瘤之一，我国肝癌人群发病率在恶性肿瘤中为第二位。肝癌复发率高，传统化疗药物对肝癌治疗及愈后效果差，寻求新型高效的抗肿瘤药物是肝癌综合治疗的重要环节。

抗肿瘤活性多肽是一类新型的抗癌药物，以相对分子量小、低毒性、高活性、易于穿透肿瘤细胞等特点，受到医药研究者的广泛关注。与传统化学药物相比，抗肿瘤多肽对肿瘤细胞具有更高的选择性，能够以多种方式给药、易于多途径吸收、且不易产生耐药性。

抗生素广泛用于治疗敏感菌所致的感染。但是，由于人们对抗生素的不合理使用，导致许多细菌产生了耐药性，甚至有产生超级细菌感染的风险，最终无药可治。所以人们一直在寻找可以代替传统抗生素的药物。多肽类抗生素具有分子量小，理化性质稳定，抗菌谱广等优点，在较低的浓度下可以快速杀死多种细菌，不易产生耐药性，非常有希望成为新一代抗生素。

两栖动物相对于其他物种具有特殊的生态地位。特殊的生存环境使得其皮肤及相应腺体进化为该物种特有的代谢系统和机体防御系统，这与其分泌物中所蕴含的许多结构新颖、功能独特的天然活性物质不无关系。在众多针对两栖动物的研究中，以蟾蜍作为生物原料资源，提取天然活性产物的研究最为活跃。蛋白和多肽是蟾蜍毒素中富含的一类天然活性产物，主要包括：抗菌肽、铃蟾肽、缓激肽、血管紧张素样肽等。除了以往关注的抗菌消炎的功能之外，近些年研究发现，蟾蜍毒素活性多肽物质，还具有抗肿瘤的特性，可以选择性杀伤肿瘤细胞。

东方铃蟾(Bombina orientalis)为盘舌蟾科铃蟾属的两栖动物，广泛分布于我国东北三省及河北、内蒙、山东等地，并于2000年被中国国家林业局列入国家保护有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物名录。由于东方铃蟾地域分布的局限性，国际上对东方铃蟾分泌物中的活性物质的及其功能性研究的报道尚未多见。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的同时具有抗菌抗肿瘤活性的东方铃蟾生物活性肽Bombinin-8及其在制药中的应用。

为实现本发明的目的，本发明提供如下技术方案：

本发明的东方铃蟾生物活性肽Bombinin-8是东方铃蟾(Bombina orientalis)皮肤分泌多肽基因编码的一直链多肽，分子量2437.93道尔顿，等电点10.5，具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，且该氨基端序列末端氨基酸的羧基被酰胺化，即该氨基酸序列可具体体现为：

Gly Ile Gly Ser Ala Ile Leu Ser Ala Gly Lys Ser Ile Ile Lys Gly Leu Ala Lys Gly Leu Ala Glu His Phe-NH₂(GIGSAILSAGKSIIKGLAKGLAEHF-NH₂)

氨基酸序列酰胺化是部分抗菌肽的典型特征，对其抗菌活性具有重要作用。

编码东方铃蟾生物活性肽的基因由560个核苷酸组成，其5’端至3’端序列具体见SEQ ID NO:2，其中，编码东方铃蟾生物活性肽成熟肽的基因为第130-204位核苷酸。

本发明的东方铃蟾生物活性肽Bombinin-8具有广谱抗菌活性和抑制三种肝癌细胞生长增殖的作用，可以用于制备抗肿瘤及抗病原微生物感染药物。

本发明同时运用基因克隆和氨基酸测序两种方法得到东方铃蟾生物活性肽的全序列，使结果更具有准确性和科学性；东方铃蟾生物活性肽Bombinin-8为单链多肽，由25个氨基酸组成，结构简单，方便化学合成及基因工程制备；该多肽具有广谱抑菌活性，能够抑制革兰氏阴性菌Escherichia coli，革兰氏阳性菌Staphylococcus aureus和真菌Candida albicans的生长；该多肽还具有显著的抗肿瘤活性，在微摩尔剂量下即可抑制三种人体肝癌细胞的生长增殖。

附图说明：