[发明专利]一种负载生长因子的明胶缓释微球及其制备方法

权利要求书

1.一种负载生长因子的明胶缓释微球，其特征在于，以血小板复合生长因子为包裹对象，以明胶微球为载体，经浸润膨胀后冷冻干燥制备所得；所述负载生长因子包括PDGF-BB、TGF-β、VEGF。

2.如权利要求1所述的负载生长因子的明胶缓释微球，所述明胶缓释微球的平均粒径为15.95±3.79μm，微球粒径分布于7～20.5μm。

3.一种如权利要求1～2所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，包括如下步骤：

1)制备空白明胶微球：向盛有液体石蜡的容器中加入Span 80，搅拌均匀后加热搅拌；再向容器中滴加明胶溶液，搅拌至乳化形成油包水型乳剂；将反应容器转入冰水浴中，待反应体系完全降温后，加入戊二醛预固化；预固化完成后，再补加戊二醛并于冰箱中静置；从冰箱中取出并倾倒出上层清液后，残余物进行后处理得到空白明胶微球；

2)制备血小板复合生长因子：取静脉全血，经离心后得PRP，向PRP中加入激活剂，混匀，离心取上层清液得血小板复合生长因子，保存备用；

3)制备明胶缓释微球：经步骤2)所得血小板复合生长因子加入装有步骤1)所得空白明胶微球的EP管中，充分浸润膨胀后进行冷冻干燥即得负载生长因子的明胶缓释微球。

4.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)中明胶溶液的制备过程如下：取固体明胶，溶于40～60℃的蒸馏水中，搅拌溶解，配成质量分数为15％的明胶溶液，置于40～60℃的水浴箱中备用。

5.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，所述步骤1)向容器中滴加明胶溶液时的搅拌速度为750～825r/min；所述步骤1)中反应体系完全降温至0～5℃后，维持0～5℃继续搅拌；所述步骤1)中加入戊二醛预固化的时间为5～10min；再补加戊二醛并于冰箱中静置12～36h；所述步骤1)中液体石蜡与Span 80的体积比为200：3；液体石蜡的体积与明胶溶液的体积比为5:1；预固化所用戊二醛和补加戊二醛的体积比为1:400；补加的戊二醛与液体石蜡的体积比为1:1。

6.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤1)中所述后处理是指向残余物中加入异丙醇脱水，然后用丙酮、异丙醇、石油醚三种溶剂依次洗涤，循环1～5次，经洗涤后的产物用抽滤机进行抽滤后，置于50～70℃的干燥箱中进行干燥，过20μm孔径筛后，装瓶储备待用。

7.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤2)中经离心后所得PRP中血小板计数为1000×10⁹/L，步骤2)中激活剂为含有100U/mL凝血酶的10％葡萄糖酸钙溶液，步骤2)中PRP与激活剂的体积比为10:1，步骤2)中PRP与激活剂混合均匀后，置于37℃水浴中30min再进行离心，所述保存备用是指将所得产品置于-80℃的冰箱中保存。

8.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤3)中，将空白明胶微球分装入EP管，经过1KGy 60Coγ照射消毒后再加入血小板复合生长因子；所述充分浸润膨胀是指在4℃环境下进行，所述充分浸润膨胀的时间为12～24h。

9.如权利要求3所述的负载生长因子的明胶缓释微球的制备方法，其中，步骤3)中，所述血小板复合生长因子的体积与空白明胶微球的质量的比例为100μL/10mg。

10.如权利要求1～2任一所述的负载生长因子的明胶缓释微球或如权利要求3～9所述的制备方法制备的负载生长因子的明胶缓释微球在制备治疗组织再生或创伤愈合药物中的应用。