[发明专利]用于类风湿关节炎诊断的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是风湿免疫病学和骨科学领域，尤其是一种用于类风湿关节炎诊断的试剂盒。

背景技术

骨是一种特化的结缔组织，作为肌肉的附着点可以支持运动、保护内脏器官和骨髓，还具有代谢功能如储存和供应体内的钙。骨组织处于形成-吸收的动态过程中，其中，骨吸收主要由破骨细胞介导。破骨细胞是一种由单核/巨噬前体细胞融合而成的具有骨吸收能力的终末期细胞，是唯一能够吸收骨质的细胞；破骨细胞的前体细胞是血液系统中的单核细胞，在特定的信号作用下，经历一系列分化过程最终分化形成成熟的破骨细胞，释放骨基质降解酶，包括抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K以及基质金属蛋白酶9等骨基质降解蛋白。当人体破骨细胞分化及成熟异常活跃时，会打破骨形成-吸收平衡，出现全身性或局部性骨侵蚀破坏。全身性骨侵蚀主要表现为骨质疏松症，可出现疼痛、脊柱变形以及骨折等表现。局部的骨侵蚀破坏主要导致关节畸形，严重影响关节功能，最终出现残疾，如类风湿关节炎。类风湿关节炎是一种常见的以进行性关节破坏为特征的慢性炎症性致残性疾病，是导致我国女性肢体残疾的首要病因。目前对于类风湿关节炎关节破坏的评估主要通过影像学检查，或者血清学检查骨破坏相关代谢产物，只能发现已经存在的关节破坏，无法预测类风湿关节炎关节破坏的进展。类风湿关节炎关节破坏的严重程度取决于破骨细胞的数量及功能。研究发现人外周血单核细胞在细胞因子RANKL和M-CSF的诱导下可分化为破骨细胞，而在相同的外界环境中类风湿关节炎患者外周血单核细胞较正常人更容易被诱导成破骨细胞，而不同类风湿关节炎患者之间外周血单核细胞分化成破骨细胞的能力也存在差异。如果能找到可以评估人破骨细胞前体细胞(外周血单核细胞)分化成破骨细胞能力的方法，可以为临床判断患者是否存在骨吸收-形成失平衡提供指导，以及有助于预测类风湿关节炎患者关节破坏进展，为临床诊疗提供指导。

现有的评估人破骨细胞前体细胞(外周血单核细胞)分化成破骨细胞能力的方法为：抽取人外周血并稀释，以淋巴细胞分离液密度梯度离心分离外周血单个核细胞，贴壁纯化后流式细胞术CD14、CD3双色荧光标记抗体检测单核细胞纯度，在单核细胞培养体系中加入破骨细胞诱导因子M-CSF和RANKL，第0、7、14、21天行TRAP染色，光镜下观察TRAP染色阳性且细胞核≥3个的细胞为成熟破骨细胞。将培养体系中人外周血单核细胞在预置了骨片的96孔板中共培养，第21天取出骨片，梯度酒精脱水及1％甲苯胺蓝染色，相差显微镜观察骨吸收陷窝情况。通过比较成熟破骨细胞数量及骨陷窝面积评估破骨细胞前体细胞分化成破骨细胞的活性。

上述方法的缺点包括操作复杂，所需时间较长，需要特殊的场地和设备进行细胞培养，容易出现细胞污染导致检测失败，结果评估时存在一定的主观因素。上述缺点主要是因为要进行细胞分离培养，模拟体内的环境加入相关的诱导因子把破骨细胞前体诱导成破骨细胞，并且还要进行染色鉴定和功能实验。由于诱导培养的时间周期比较长，对操作人员的技术要求高，需要超净台、细胞培养箱等专业的设备，因此难以推广应用。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种操作方便、能快速准确诊断受试者类风湿关节炎的试剂盒。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种类风湿关节炎诊断试剂盒，所述试剂盒包含用于检测血液中CD14阳性的单核细胞中PGC1β阳性细胞的试剂。

优选地，所述试剂包含CD14抗体、同型对照抗体、PGC1β抗体和荧光二抗。所述抗体优选是被标记的抗体，例如生物素化的抗体。如本文所用的术语“抗体”是指特异性结合至特定抗原或与特定抗原免疫应答的免疫球蛋白分子，并且包括抗体的多克隆、单克隆、遗传工程化和以其它方式修饰的形式，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、异缀合抗体(例如，二-、三-和四-特异性抗体、diabody、triabody和tetrabody)以及抗体的抗原结合片段包括例如Fab'、F(ab')₂、FAB、FV、rIgG和scFv片段；抗体可以包括嵌合的、灵长类化的、人源化的或人抗体；可与本发明相关使用的抗体可使用本领域已知的各种各样的技术，包括使用动物免疫、杂交瘤、重组和噬菌体展示技术或其组合来制备；可与本发明相关使用的抗体还可从供应商购买获得。