[发明专利]一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法

权利要求书

1.一种检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备待分析试液；

步骤2：绘制胆固醇溶液的吸光度随浓度变化的标准变化曲线；

步骤3：在待分析试液中加入显色剂，进行显色反应，测量其吸光度；

步骤4：根据待分析试液的吸光度与所述标准变化曲线计算待分析试液的胆固醇含量；

其中，所述步骤1具体包括：

步骤1.1：制备禽蛋样品，并对其进行皂化；

步骤1.2：对皂化后的所述禽蛋样品进行萃取，得到萃取液；

步骤1.3：将所述萃取液制备成待分析试液。

2.根据权利要求1所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.1中，所述禽蛋样品为全蛋样品，所述全蛋样品的制备过程包括：选取禽蛋，去掉蛋壳，将蛋黄和蛋清充分混匀。

3.根据权利要求1所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.1中，所述禽蛋样品为蛋黄样品，所述蛋黄样品的制备过程包括：选取禽蛋，去掉蛋壳和蛋清，用滤纸吸干蛋黄表面的蛋清，再将蛋黄充分混匀。

4.根据权利要求2或3所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.1中，对所述禽蛋样品进行皂化的过程包括：取禽蛋样品1.00-2.00g，并加入皂化剂，在60-70℃的温水中水浴50-70min；

其中，所述皂化剂由体积为5-15mL、浓度为600g/L的氢氧化钾溶液和体积为15-25mL的甲醇混合组成。

5.根据权利要求4所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.2中，将皂化后的所述禽蛋样品冷却至室温，加入15-25mL水，加入萃取剂萃取，得到萃取液。

6.根据权利要求5所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.2中，得到所述萃取液后，还向所述萃取液加入浓度为50g/L的氯化钠溶液3-4mL，再将所述萃取液水洗至酸碱中性。

7.根据权利要求6所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤1.3中，将所述萃取液转至鸡心瓶中，在45-55℃的温水中水浴旋转蒸干，用无水乙醇溶解定容至10mL，制得待分析试液。

8.根据权利要求1所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤2中，配置一系列已知浓度的胆固醇溶液，加入所述显色剂并进行显色反应，分别测量其吸光度，并绘制胆固醇溶液的吸光度随胆固醇浓度标准变化曲线。

9.根据权利要求1所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤2和步骤3中，所述显色剂包含80～100U/L胆固醇酯酶、40～60U/L胆固醇氧化酶、1000～1500U/L过氧化物酶、170.0-175mg胆酸钠、10.0-10.5mg 4-氨基安替比林、30.0-35.0mg苯酚和280.0-320mg聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.3mol/L的磷酸盐缓冲溶液，且所述显色反应的显色时间为10-20min，显色温度为35-40℃。

10.根据权利要求1至9任一项所述的检测禽蛋中胆固醇含量的酶比色法，其特征在于：所述步骤4中，根据待分析试液的吸光度在所述标准变化曲线上读取待分析液中胆固醇的浓度，并根据待分析液中胆固醇浓度计算待分析试液的胆固醇含量，具体公式为：

$X=\frac{c\×V\×100}{m}$

其中，X表示待分析液中胆固醇含量，单位为mg/100g；C表示由标准曲线查得的待分析试液中胆固醇的浓度，单位为mg/mL；V表示待分析试液的体积，单位为mL；M表示待分析试液的质量，单位为g。