[发明专利]仲醇的氧化和胺化

权利要求书

1.包括下述步骤的方法：

a) 提供仲醇，

b) 通过与NAD(P)⁺依赖性的醇脱氢酶接触氧化所述仲醇，和

c) 使步骤a)的氧化产物与转氨酶接触，

其中所述NAD(P)⁺依赖性的醇脱氢酶和/或所述转氨酶是重组的或分离的酶。

2.根据权利要求1的方法，其中所述仲醇是选自以下的醇：α-羟基羧酸，环烷醇，优选双(对羟基环己基)甲烷，式R¹-CR²H-CR³H-OH的醇及其醚和聚醚，和仲烷醇，优选2-烷醇，

其中R¹选自羟基、烷氧基、氢和胺，R²选自烷基，优选甲基、乙基和丙基，和氢，且R³选自烷基，优选甲基、乙基和丙基。

3.根据权利要求2的方法，其中所述仲醇是下式的仲醇

H₃C-C(OH)H-(CH₂)_x-R⁴，

其中R⁴选自-OH、-SH、-NH₂和-COOR⁵，x是至少3，且R⁵选自H、烷基和芳基。

4.根据权利要求1的方法，其中通过用单加氧酶羟基化所述式的相应烷烃进行步骤a)，所述单加氧酶优选地是重组的或分离的单加氧酶。

5.根据权利要求1-4中的任一项的方法，其中所述NAD(P)⁺依赖性的醇脱氢酶是具有至少一个锌原子作为辅因子的NAD(P)⁺依赖性的醇脱氢酶。

6.根据权利要求5的方法，其中所述醇脱氢酶是赤红球菌的醇脱氢酶A(数据库代码AJ491307.1)或其变体。

7.根据权利要求4-6中的任一项的方法，其中所述单加氧酶选自：恶臭假单胞菌的AlkBGT，得自热带假丝酵母或得自鹰嘴豆的细胞色素P450。

8.根据权利要求1-7中的任一项的方法，其中所述转氨酶选自这样的转氨酶及其变体，其特征在于，在与青紫色素杆菌ATCC 12472的转氨酶(数据库代码NP_901695)的Val224对应的氨基酸序列的位置处，其具有选自异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和亮氨酸的氨基酸，且在与青紫色素杆菌ATCC 12472的转氨酶(数据库代码NP_901695)的Gly230对应的氨基酸序列的位置处，其具有除了苏氨酸以外的氨基酸，且优选选自丝氨酸、半胱氨酸、甘氨酸和丙氨酸的氨基酸，或者所述转氨酶选自：河流弧菌的转氨酶(AEA39183.1)、巨大芽孢杆菌的转氨酶(YP001374792.1)、脱氮副球菌的转氨酶(CP000490.1)及其变体。

9.根据权利要求1-8中的任一项的方法，其中在分离的或重组的丙氨酸脱氢酶和无机氮源存在下进行步骤b)和/或步骤c)。

10.根据权利要求1-9中的任一项的方法，其中由NAD(P)⁺依赖性的醇脱氢酶、转氨酶、单加氧酶和丙氨酸脱氢酶组成的组中的至少一种酶是重组的，且以包含相应酶的全细胞催化剂的形式提供。