[发明专利]树蛙防御肽cathelicidin-PP及其基因和应用

说明书

本发明涉及一种树蛙防御肽cathelicidin‑PP及其基因和应用，属于生物医学领域。该防御肽cathelicidin‑PP是中国两栖类树蛙防御肽基因编码的一种第七位半胱氨酸和第十一位半胱氨酸组成一对分子内二硫键的环状多肽，分子量3366.08道尔顿，等电点10.05，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。编码树蛙防御肽cathelicidin‑PP前体的基因GenBank accession KY610282由615个核苷酸序列组成，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示；其中第346–441位核苷酸为成熟树蛙防御肽cathelicidin‑PP的编码基因。树蛙防御肽cathelicidin‑PP在制备大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌和光滑念球菌引起的感染疾病的治疗药物中的应用。本发明对大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌和光滑念球菌引起的感染疾病具有显著的抑制细菌和真菌生长的作用。

技术领域：

本发明涉及一种树蛙(Polypedates puerensis)防御肽cathelidin-PP及其基因和应用，属于生物医学领域。

背景技术：

近年来的研究表明，抗菌肽是所有动物、植物和微生物防御系统中的一个重要组成部分。它们是机体为抵御病原微生物侵袭而产生的一类小分子活性多肽，具有分子量小、稳定性好、杀菌迅速和不易产生耐药性等特点。这些特性使得抗菌肽具有非常广阔的运用前景，有望替代目前临床上易于产生耐药性的传统抗生素药物。抗菌肽不易产生耐药性的原因是，其杀菌机理与传统抗生素不同。它们主要是作用于细菌的细胞膜,破坏其稳定性，进而细胞膜渗透性发生改变，使得内容物外泄导致细胞死亡。不同物种来源或同一物种中抗菌肽的结构形式和生物活性差别较大。国内外研究人员一直致力于从不同物种中发掘结构新颖的抗菌肽，直接利用或者以其为模板进行分子改造。目前，已有抗菌肽用于海产品保鲜和动物饲料添加剂中。结合生态环境从各种自然资源中发掘具有潜在药用价值的抗菌肽是目前多肽新药研究的一个热点。

两栖动物是抗菌肽资源发掘中最重要的一类资源，其皮肤裸露，为抵御环境中各种微生物的侵袭，它们能够分泌多种分子结构新颖、功能复杂多样的的抗菌肽。这些活性多肽广泛参与机体的各种生理活动，具有各种药理活性，如抗微生物、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、创伤修复、镇痛等作用。树蛙与其它的两栖动物明显不同的地方就是，它们的大部分时间都是在树上度过，而其它的两栖动物大部分时间都在水里或陆地上。这种特异的树栖生活使得它们面临的天敌以及外界微生物都与其他的两栖动物有所差异，经过适应性进化，必然拥有一套具有自身优势的先天免疫防御系统。普洱泛树蛙Polypedates puerensis主要分布于云南省普洱市周边地区，是我国特色资源动物之一，其皮肤分泌物中cathelicidin家族的抗菌肽尚无报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种新的具有广谱抗微生物(包括革兰氏阴性菌和真菌)的树蛙防御肽及其基因和应用。

本发明的防御肽cathelicidin-PP是中国两栖类树蛙防御肽基因编码的一种第七位半胱氨酸和第十一位半胱氨酸组成一对分子内二硫键的环状多肽，分子量3366.08道尔顿，等电点10.05，多肽全序列一级结构(氨基酸序列SEQ ID NO:1)为：

(ASENGKCNLLCLVKKKLRAVGNVIKTVVGKIA)，其第七位半胱氨酸和第十一位半胱氨酸组成一对分子内二硫键。

该树蛙防御肽前体的编码基因由615个核苷酸(SEQ ID NO:2)组成，其自5’端至3’端序列为:

其中，第346–441位核苷酸为成熟树蛙防御肽cathelicidin-PP的编码基因。

本发明的树蛙防御肽cathelicidin-PP在制备大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、绿脓杆菌和光滑念球菌引起的感染疾病的治疗药物中的应用。