[发明专利]一种枯草芽孢杆菌的新型培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种活性菌的培养方法，更具体而言，涉及一种枯草芽孢杆菌的新型培养方法，属于微生物培养和微生物工程技术领域。

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis)属于芽孢杆菌属更进一步的属于革兰氏阳性菌，呈单个细胞形式，无荚膜，通常为(0.7-0.8)×(2-3)微米。

枯草芽孢杆菌是一种益生菌，其具有多种生物功能，可应用于多个技术领域中，例如：其具有繁殖速度快、产生大量内生消化酶、提高饲料营养品质、提高肥效、可作为微生物农药、降解饲料中复杂有机物、促进吸收、增强动物免疫力和抗病力等等，从而在畜牧业、饲料业、农药、肥料、杀菌、石油开采、园林业、蛋白质多肽合成等多个领域中都具有广泛的应用，且其应用领域和新的用途也一直在研究和拓展中。

正是由于枯草芽孢杆菌如此重要的作用，人们对于各种枯草芽孢杆菌制品以及枯草芽孢杆菌的培养方法和培养基等进行了大量的深入研究，取得了诸多的研究成果，例如：

CN1506455A公开了一种植物枯草芽孢杆内生菌及其制剂，其菌株BS-2(Bacillussubtilis，CGMCC NO.0819)，是由辣椒叶片内分离，经人工诱变筛选出的新菌株。可在较低的菌液浓度下主动进入植物体内，并能在植物体内定殖繁殖和传导；对植物同时具有促进生长和防病作用；其制剂用于浸种时对白菜和辣椒苗鲜重可增加90％以上；喷雾施用时，对辣椒苗和果的炭疽病、白菜炭疽病及香蕉炭疽病具有80％以上的防病效果。

CN1508243A公开了一种用于净化水质的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，CCTCC，M202045以及用该菌在固体培养基，适当的碳、氮比条件下培养、发酵然后经干燥，生产一种有效净化养殖水质的枯草芽孢杆菌制剂。该菌去除水体COD效率高，能迅速降解有机物，具有一定的反硝化能力、降解残渣能力和较强的降解硫化物的能力，小试结果表明：该菌在24小时消除COD可达76％；小试菌剂有效活菌数达3000亿/克以上；中试菌剂有效活菌数达200亿/克以上；同时具有耐盐、耐渗透压、维持养殖水体适宜pH等优良特性。

CN101933946A公开了一种禽类枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，包括下述步骤：(1)用牛肉汤蛋白胨培养基复活枯草芽孢杆菌，作为一级种子；(2)将复活的菌液进行扩大培养，采用牛肉汤蛋白胨培养基加生物素培养，作为二级种子；(3)将牛肉汤蛋白胨、豆芽汁与二级种子液均匀混合，发酵培养；(4)将发酵液过滤，滤液即细菌代谢物制备口服液，菌体沉淀用石粉作为载体吸附干燥制备干粉，作为饲料添加剂。所述方法能改善固体发酵难于分离菌体的问题，可极大地提高提纯化效率，能满足工业生产的需要。同时枯草芽孢杆菌代谢物的作用也被充分利用。所述菌体干粉饲料添加剂在应用于禽类时，能促进禽类的生长及免疫力提高。

CN102168055A公开了一种高芽孢率的枯草芽孢杆菌发酵方法，属于微生物发酵工程领域。该方法是经激活枯草芽孢杆菌、二步发酵培养生产目标产品。先接种激活的枯草芽孢杆菌，培养温度为35-38℃、罐压0.02-0.06Mpa、通气比例为1:0.5-1:1、搅拌转数为150-200rpm，发酵培养8-14小时，得到种子菌液，再将种子菌液接种培养20-26小时，得到高芽孢率枯草芽孢杆菌液体产品。所述方法的培养基成分易得且价格便宜、工艺参数简单、发酵周期短，所得的枯草芽孢杆菌活菌数高，并且芽孢率高，达到3.0×10⁹CFU/ml以上，显著提高产品的芽孢数和产品质量。

CN102199569A公开了一种用于复合微生物肥料的枯草芽孢杆菌深层发酵培养基，所述培养基包括麸皮粉和小麦粉，重量百分含量分别为：小麦粉0.8％-1.5％，麸皮粉1.5-4％。所述培养基组成简单，配置时不需另外调节pH，并能促进菌体生长和芽孢形成，从而提高了产品质量，降低了生产成本。

CN102220266A公开了一种枯草芽孢杆菌制剂生产方法及其开放式发酵方法。该生产方法包括以下步骤：种子培养基的制备、种子培养基的发酵、液体发酵培养基的制备、菌种的液体发酵、枯草芽孢杆菌制剂中培养基成分的配置及灭菌、枯草芽孢杆菌培养制剂的生产。本发明根据菌株的特性，将枯草芽孢杆菌菌种与培养基成分混合制成枯草芽孢杆菌培养制剂，采用无需灭菌、接种和密闭培养条件的开放式液体培养方法进行小规模枯草芽孢杆菌的发酵培养，不仅方便枯草芽孢杆菌制剂用户的使用，更能大幅降低单位活菌数的生产成本，促进我国枯草芽孢杆菌微生态制剂在饲料和水产行业的使用，加速我国发酵床养殖技术的推广。