[发明专利]一种解决超高效液相色谱电喷雾质谱上发生氧化反应问题的方法

说明书

技术领域：

本发明属于超高效液相色谱质谱仪器分析领域，特别是涉及一种解决易氧化分析物在超高效液相色谱电喷雾质谱上氧化反应问题的方法。

背景技术：

超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)是近十多年来迅速发展起来的高通量分析技术，已经广泛应用于环境科学、药物研发、临床化学、蛋白质组学、代谢组学、疾病诊断、营养食品科学、毒理学及天然产物化学等领域。UPLC-MS已经成为多类分析实验室普遍使用的检测技术，主要用于检测极性和中等极性有机化学物。UPLC-MS由产生和耐受超高压的液相色谱系统和质谱检测器组成，UPLC的核心是超高效液相色谱柱和耐高压液相泵。超高效液相色谱柱的填料颗粒直径一般在2.0μm以下，最先进的色谱柱填料直径已达到1.7μm。超高效液相色谱柱具有远超普通液相色谱柱的柱效，具有强大的分离能力，能在短时间内达到良好的分离效果，使分析效率得以显著提高。UPLC-MS的接口一般有电喷雾离子源(ESI)、大气压化学电离源(APCI)和大气压光学电离源(APPI)三种，其中以ESI源的应用最为普遍。UPLC与MS的结合具有快速、高效和可靠的分析能力，已经成为分析各类化合物的黄金法则。然而，具有强大分析能力的UPLC-MS也并不是完美无缺的，该技术隐藏着一些缺陷。例如，一些易氧化和易还原的化合物可能会在ESI源上发生氧化还原反应(Kanev IL,Mikheev AY,Shlyapnikov YM,Shlyapnikova EA,Morozova TY,Morozov VN.Anal.Chem.2014,86,1511-1517；Pasilis SP,Kertesz V,Van Berkel GJ.Anal.Chem.2008,80,1208-1214；Boys BL,Kuprowski MC,Noe JJ,Konermann L.Anal.Chem.2009,81,4027-4034.)，从而导致检测信号的降低或对化合物鉴定造成误判。此外，使用UPLC-MS时，UPLC柱能产生强大的剪切力，可导致大分子化合物如聚合物断链，从而影响分析结果(Uliyanchenko E,Van der Wal S,Schoenmakers PJ.2011,1218,6930-6942；Uliyanchenko E,Cools PJ,van der Wal S,Schoenmakers PJ.Anal.Chem.2012,84,7802-7809.)。

最近，我们在一项研究中首次发现，UPLC能导致还原性分析物在UPLC柱上发生氧化反应(图1)，造成分析物信号降低和不稳定，进而导致定量分析不能进行，定性分析也有误判的风险。在该研究中，我们已经确证了氧化反应发生在UPLC柱的出口筛板上(Tang C,Tan J,Jin J,Xi S,Li H,Xie Q,Peng X.Rapid Commun.Mass Spectrom.2015,29,1863-1873.)。

发明内容：

本发明的目的是提供一种解决超高效液相色谱电喷雾质谱上发生氧化反应问题的方法。

本发明的解决超高效液相色谱电喷雾质谱上发生氧化反应问题的方法，其特征在于，在超高效液相色谱电喷雾质谱的流动相中加入(NH₄)₂S作为还原剂，以此为流动相进行洗脱。

优选：所述的方法包括以下步骤：

a、配置还原剂溶液：取(NH₄)₂S，用水配置至1mmol/L的(NH₄)₂S溶液，以此作为流动相A；

b、色谱条件：

超高效液相色谱仪：AcquityTM Waters UPLC；

色谱柱：Waters公司生产的各类UPLC柱；

流动相：流动相A为1mmol/L的(NH₄)₂S溶液，流动相B为甲醇或乙腈；

c、质谱条件：

质谱仪：Waters Synapt Q-TOF质谱

离子源：电喷雾离子源，正或负离子模式；

毛细管电压：2.5KV；

锥孔电压：50V；

脱溶剂气温度：400℃；离子源温度：100℃；脱溶剂气流速：600L/h；锥孔气流速：50L/h；四极杆采集质量数范围：100-1000u。

本发明的有益效果如下：