[发明专利]表达羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的rBCG及其构建方法

说明书

本发明提供一种表达羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的rBCG，其是将携带有经过密码子优化的羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的表达载体转入BCG中构建得到的。由布氏菌产生的胞质结合蛋白PBP39(编码基因为P39)和布氏菌核糖体蛋白L7/L12均为T细胞抗原。卡介苗BCG是迄今唯一商品化的预防结核的疫苗，它不仅具有显著的免疫佐剂效应，而且是一种性能良好、安全性高的外源基因表达宿主。利用BCG表达经过密码子优化的布氏菌P39和L7/L12融合基因既可以提高目的基因的表达量，所得rBCG疫苗又能模拟布氏菌胞内感染与寄生的特性，更有效地诱导机体产生免疫应答，还能发挥BCG作为表达宿主的高安全性、制备简单、成本低廉等优点以及BCG本身所具有的免疫佐剂效应，有望成为新型的布鲁氏菌病疫苗。

技术领域

本发明涉及基因工程及疫苗制备技术领域，具体地说，涉及一种表达羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的rBCG及其构建方法。

背景技术

布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病，是由布氏菌感染引起的一种人畜共患传染病。布氏菌是一种兼性胞内寄生菌，对人和哺乳动物具有高度感染性和致病性。该菌属主要包括羊种、牛种、猪种和犬种等6个生物种，中国流行的主要是前3种，其中以羊种布氏菌感染最常见。布病的传播方式为动物—动物和动物—人群。羊、牛、猪等家畜最易感染，动物感染后可导致生殖器官和胎膜发炎、流产、不育和各种组织病变，极大地增加了向人群传播的几率。人群对布氏菌普遍易感，一般羊种布氏菌对人危害最大。人与病畜及受污染的畜产品接触后，布氏菌可通过消化道、呼吸道、泌尿生殖道、皮肤及眼结膜等途径感染。

近20年来，我国布病疫情日趋严重并由迅速蔓延的趋势。国内外现行的布病疫苗均为减毒活疫苗，这些疫苗普遍存在毒性较大、保护周期较短、无法区分自然感染和疫苗接种等诸多不足，无法满足布病防控的现实需求。因此，新型布病疫苗的研究与开发对于控制布病疫情的蔓延具有重要意义，也是国内外布病研究的热点。现已证实的布氏菌T细胞抗原包括PBP39、L7/L12和Cu-Zn SOD等，这些蛋白及其编码基因已用于布病亚单位疫苗和DNA疫苗的实验研究。

卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)是目前唯一用于预防结核病的疫苗，在世界卫生组织全球性扩展免疫计划中广泛使用。BCG具有数十年大量安全使用记录、热稳定性好、生产成本低、显著的佐剂效应以及经口服可诱导有效粘膜免疫等特点，同时BCG也是一种极具吸引力的活疫苗载体，利用BCG作为新型疫苗的表达宿主前景诱人。近年来，以BCG为载体的重组BCG疫苗研发日益受到国内外研究学者的关注和重视，针对的病原体涉及细菌、病毒、寄生虫及肿瘤等，具有广阔的发展前景。

目前国内外尚未见有关构建携带羊种布氏菌M5株39kDa胞质结合蛋白PBP39编码基因(P39基因)与核糖体蛋白L7/L12编码基因(L7/L12基因)的融合基因(P39-L7/L12基因)重组BCG的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种表达羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的rBCG及其构建方法。

本发明的另一目的是提供所述rBCG在制备布鲁氏菌病疫苗中的应用。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种基因表达盒，包含由经过密码子优化的羊种布氏菌P39基因和经过密码子优化的L7/L12基因组成的融合基因。

本发明中，用于组成羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的P39、L7/L12基因均来自于羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)M5菌株(CMCC55009)，且经过密码子优化，所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供一种表达载体，所述表达载体携带有羊种布氏菌P39和L7/L12融合基因的表达盒。

优选地，所述表达载体的出发载体为大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV361。