[发明专利]随机测定含EPA链化合物的方法

说明书

本发明公开了一种随机测定含EPA链化合物的方法，包括以下步骤：1)、样品前处理：将鲫鱼肌肉组织进行前处理，得脂质粗提物；2)、进样：脂质粗提物用有机溶剂定容、过滤、使用针泵注射器注射进质谱；3)、质谱检测：使用负离子模式，根据特征子离子寻找所有含有该子离子的母离子，使用Analyst软件采集数据；4)、数据分析：将步骤3)质谱检测所得谱图进行分析，得各个离子峰的结构信息。采用本发明能随机非定向获知样品中所有含有EPA脂肪酸链的化合物。

技术领域

本发明属于仪器分析领域，涉及一种随机测定含EPA链化合物的方法，具体指一种从复杂样品中无目标性随机扫描含有EPA脂肪酸链的化合物的检测分析方法。

背景技术

EPA(Eicosapentaenoic Acid)，即二十碳五烯酸，是鱼油的主要成分。EPA属于Ω-3系列多不饱和脂肪酸，即从甲基端数第一个双键的位置在第三碳位的多不饱和脂肪酸。EPA是人体不可缺少但自身又不能合成的重要营养元素，因此被称为人体必需脂肪酸。虽然亚麻酸在人体内可以转化为EPA，但此反应在人体中的速度很慢且转化量很少，远远不能满足人体对EPA的需要，因此必须从食物中直接补充。

医学和营养学研究表明EPA具有抑制血小板凝聚、抗血栓、舒张血管、调整血脂等治疗和预防心脑血管病的功能，EPA过氧化物和自由基可抑制肿瘤细胞表达，缩短染色体的端粒，促进肿瘤细胞的凋亡。EPA能减少有害的免疫反应，并对治疗由自身免疫缺陷引起的炎症有效。Ω-3脂肪酸，包括EPA在内，对肺病、肾病、2型糖尿病、大肠溃疡和节段性回肠炎的治疗都会起到积极的作用。近来又发现其还具有促进脑细胞生长、发育，改善大脑机能，提高记忆力和学习能力，增强视网膜反射能力以及防治老年性痴呆等提高生命质量的功能。因而，提取分离高纯度EPA已成为发达国家竟相研究的热点。

商业上EPA的来源主要是脂肪含量高的海洋鱼类，其EPA的质量分数可达到20％～30％。随着海况的变化和海上捕捞强度的不断增加，海上渔业资源结构发生了重大变化，环境污染、过度捕捞等因素造成资源短缺，促使人们积极寻找开发富含EPA的新资源。

目前EPA的相关检测方法主要以气相色谱质谱联用法为主，该方法主要检测游离EPA及甲酯化或乙酯化EPA。含EPA链化合物的检测方法主要为液相色谱质谱联用法。目前报道的方法均为定向筛选法，即已知化合物A具有EPA链，根据A的化学或物理特征从样品中定向筛选化合物A。而随机非定向筛选法未有报道。

建立随机测定含EPA链化合物的方法，快速扫描复杂样品中含有EPA脂肪酸链的化合物并进行结构鉴定和含量测定，有利于快速筛选EPA原料资源，促进EPA保健品产业发展。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作简便的复杂基质中随机测定含EPA链化合物的方法检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种随机测定含EPA链化合物的方法，包括以下步骤：

1)、样品前处理：

将鲫鱼肌肉组织洗净后研磨成糜，在糜中加入有机溶剂Ⅰ后震荡提取，提取完毕后加入纯水并震荡混匀；

所得的混合物用冷冻离心机离心，移取下相溶液，将该下相溶液干燥(用氮气进行低温吹干)，得脂质粗提物；

有机溶剂Ⅰ为甲醇：氯仿＝1：2体积比的混合液或者为甲醇：二氯甲烷＝1：2体积比的混合液，糜与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/15～30ml；所加入水的量为有机溶剂Ⅰ的0.5体积倍；

2)、进样：

将脂质粗提物用甲醇：二氯甲烷＝1：2体积比的有机溶剂定容至100mL作为样品；

移取1mL样品过0.22μm滤膜后作为待测样液，使用针泵注射器注射进质谱；

3)、质谱检测：