[发明专利]一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法

说明书

本发明提供一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，涉及生物技术领域。一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，包括以下步骤：（1）将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的接头蛋白加入口蹄疫病毒灭活抗原中，混匀，孵育；（2）加入纯化载体，混匀，孵育；所述纯化载体为乳酸乳球菌骨架；（3）离心，取沉淀。本发明纯化浓缩方法能够高效纯化口蹄疫病毒灭活抗原、高效除去杂质，抗原回收效率高、浓缩倍数高，对设备要求低，操作简单，成本低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说，涉及到一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法。

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，主要感染猪、牛、羊、骆驼等偶蹄类动物。目前已经发现O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia17个血清型，各血清型之间没有交叉保护，这就增加了口蹄疫防控的难度，一旦爆发就会给养殖业带来严重的经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为通报性疫病，也是国内首先防控的A类头号疫病。在我国，主要采用接种灭活疫苗的方式来控制该病。我国口蹄疫疫苗已形成规模化生产，但大部分口蹄疫疫苗均为粗制疫苗，抗原含量低，异源蛋白(细胞蛋白、牛血清蛋白、非结构蛋白、内毒素)含量在95％以上，大面积接种存在较严重的副反应，口蹄疫防制受到了影响。

针对FMDV灭活抗原制苗过程中抗原含量不足、纯度不高的问题，当前生产中使用的大规模浓缩纯化方法是膜过滤澄清技术配合中空纤维浓缩技术等物理学纯化工艺。这种工艺能够在一定程度上将抗原进行浓缩、去除部分杂蛋白，提高制苗抗原的纯度和含量，但却存在操作复杂、对技术设备要求高，纯化浓缩成本较高且抗原回收率和浓缩倍数较低、抗原中杂蛋白去除量较小等缺陷。

发明内容

本发明的目的是提供一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，该方法能够高效纯化口蹄疫病毒灭活抗原、高效除去杂质，抗原回收效率高、浓缩倍数高，对设备要求低，操作简单，成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种口蹄疫病毒灭活抗原纯化浓缩方法，包括以下步骤：

(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的接头蛋白加入口蹄疫病毒灭活抗原中，混匀，孵育；

(2)加入纯化载体，混匀，孵育；所述纯化载体为乳酸乳球菌骨架；

(3)离心，取沉淀。

在本发明中，步骤(1)中孵育条件如下：孵育过程中震荡，孵育温度为20-25℃，孵育时间为45min-60min。

在本发明中，步骤(2)中孵育条件如下：孵育过程中震荡，孵育温度为20-25℃，孵育时间为25min-35min。

优选的技术方案中，接头蛋白加入的比例如下：10^8.7TCID₅₀-10^9.2TCID₅₀的口蹄疫病毒灭活抗原中加入40～60μg的接头蛋白。

优选的技术方案中，纯化载体加入的比例如下：10^8.7TCID₅₀-10^9.2TCID₅₀的口蹄疫病毒灭活抗原中加入2.4×10⁹-2.6×10⁹个纯化载体。

在本发明中，所述接头蛋白是通过诱导表达携带所述接头蛋白编码基因的重组菌获得的。

在本发明中，所述重组菌是将接头蛋白编码基因插入表达载体pET32中NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点之间，然后导入大肠杆菌后获得的。