[发明专利]一种乳蛋白和乳尿素含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于畜产品质量检测技术领域，具体涉及一种牛奶中蛋白和尿素的检测方法。

背景技术

奶牛日粮能量和蛋白质平衡一直是反刍动物营养研究的热点问题。若日粮配制不当，会造成日粮能氮不平衡的问题，而过量的营养不但增加了奶牛的代谢负担和饲养成本，而且最终排放到环境中导致污染。根据我国的蛋白质新体系，冯仰廉提出“瘤胃能氮平衡”原理，来指导奶牛日粮的配制。通过检测牛乳中的乳蛋白和乳尿素(MUN)，可以评价奶牛日粮是否满足能氮平衡，其判断标准见表1。

表1利用不同乳蛋白和MUN水平评价日粮中蛋白质和能量水平

奶牛生产上，及时、经常检测乳蛋白和乳尿素含量，是推广奶牛能氮平衡理论指导改进奶牛日粮配方的必要条件之一。牛乳中蛋白质的检测方法有：考马斯亮蓝方法、凯氏定氮方法、乳成分快速检测仪分析法等；牛乳中的尿素检测方法有：紫外一可见分光光度计法、近红外光谱法、乳成分快速检测仪分析法等，均需要精密分析仪器和相应的技术人员。目前牛场即没有相关仪器，也缺乏相应的技术人员。

因此，需要研究一种简便、易行、成本低廉的乳蛋白和乳尿素含量的检测方法，对牛场工作人员进行简单的培训即可准确分析出乳中蛋白和尿素的含量。

中国专利CN201510172395.8公开了一种牛奶蛋白的检测方法，建立对比值(沉淀质量：牛奶体积)法检测牛奶蛋白含量的方法，发现影响牛奶蛋白含量的测定方法包括牛奶的静置时间、离心时间、离心转速、冰乙酸浓度等因素，获得了沉淀牛奶蛋白的最佳参数，即静置9min、离心7min、离心12000r/min、冰乙酸浓度为0.3mol/L。对牛奶蛋白含量与比值的相关性数据进行偏最小二乘法分析，获得牛奶蛋白含量X与比值Y的回归线性方程：Y＝0.0645X+0.0581，R²＝0.9896，在2.0-4.0g/100mL范围内时，牛奶蛋白含量X与比值Y之间存在较强的线性相关。但该专利存在以下缺点：(1)该方法测定鲜奶的乳蛋白含量时误差偏大，原因是鲜奶是未经加工过的原料乳，鲜奶乳脂肪球的直径比均质后的牛奶的乳脂肪直径大得多，鲜奶乳脂肪球易浮于离心液上部，导致沉淀质量减小，从而导致测定结果偏低。(2)该方法不能同时测定乳尿素含量。(3)该方法需要使用离心机，天平等设备，不便牛场推广。

中国专利201410830036.2公开了一种尿素快速检测试剂盒，其包括试剂I、试剂II、试剂III和试剂IV，其中：试剂I包括EDTA二钠和海藻糖；试剂II为脲酶；试剂III包括无水柠檬酸、水杨酸钠和硝普钠；试剂IV包括氢氧化锂、二氯异氰尿酸钠和无水硫酸钠。本发明的试剂盒和检测方法能够有效屏蔽游泳池水中的铜离子和余氯对检测结果的干扰，量程为0.5-8.0mg/L，测试时间约20min，试剂在室温下保质期长，准确率高、特异性强、稳定性好，方便快捷，适用于游泳池的现场快速检测，测试结果与国标检测方法相近，因此该试剂盒具有良好的应用前景。但该专利存在以下缺点：(1)该方法不能测定蛋白质含量。(2)该方法用于游泳池水样本检测，需要掩蔽铜离子和余氯，牛奶样本中尿素检测需要掩蔽的主要离子为钙离子。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种乳蛋白和乳尿素含量的检测方法，该方法设备简单便宜，检测方便，特别适合在牛场推广。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

(1)乳蛋白的测定：取浓缩瓶，精密量取乳汁0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀剂1，混匀摇匀，然后加入3-5mL沉淀剂2，盖上盖子，上下混匀。静止12-24小时，观察沉淀体积，沉淀体积与乳蛋白含量成正比。沉淀体积与沉淀剂用量相关。

(2)建立线性方程：取浓缩瓶5个，分别精密量取蛋白浓度为2.6，2.8，3.0，3.2，3.4g/100mL标准乳样0.6-1.0毫升，加入3-5mL沉淀剂1，摇匀，然后加入3-5mL沉淀剂2，盖上盖子，上下混匀，静止12-24小时，读取沉淀体积，以沉淀体积为纵坐标(mL)，以蛋白浓度为横坐标(g/100mL)，得线性标准曲线，其方程可以表示为：

y＝ax+b，其中x为蛋白质浓度，以g/100mL计，其中y为沉淀体积，以mL计，其中a，b为常数，跟沉淀剂浓度有关。

其中步骤(1)中沉淀剂1的制备方法如下：称取2.12g亚铁氰化钾，用超纯水溶解并定容至100mL。

其中步骤(1)中沉淀剂2的制备方法如下：称取4.38g乙酸锌，用超纯水溶解并定容至100mL。