[发明专利]一种用于富含脂滴组织快速完全透明化的方法

说明书

本发明涉及一种用于富含脂滴组织快速完全透明化的方法，具体地，本发明的方法包括以下步骤：提供一水凝胶固定处理后的富含脂滴的组织样品；对所述的组织样品进行透明化预处理，得到预处理样品；对所述的预处理样品进行透明化处理，得到透明化样品；以及对所述的透明化样品进行透明化后处理，得到透明化终样品。本发明的方法不会对生物组织的精细结构造成破坏，并且可以显著提高生物组织的光学成像的深度。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及一种用于富含脂滴组织快速完全透明化的方法，所述的方法可以实现对所有器官和组织，包括整个动物身体的完整透明化，从而获得三维高分辨率结构信息。

背景技术

研究生物医学组织在细胞和亚细胞尺度的三维空间结构，是理解其正常功能机制的基础，也能为掌握器官疾病的发生和发展过程提供基础依据。以前对人和其它动物组织的研究主要为解剖学尺度的研究，而在细胞和亚细胞尺度的研究则受限于解析能力的限制，通常只能研究组织切片的二维结构信息。基于组织连续切片的三维重构技术研究组织则非常耗时和费力。近年来组织透明化技术的迅猛发展使人们获得完整生物组织和器官的高分辨率三维结构成为可能。斯坦福大学Deisseroth教授实验室发明的CLARITY技术最早应用于脑组织的透明化和三维结构研究，并逐步拓展到其它主要器官，如肾脏，小肠等，展示了这种技术在获取生物组织完整三维高分辨率结构信息方面的巨大潜在价值。

然而，将CLARITY技术拓展到所有器官的透明化时，发现有些器官即使用表面活性剂进行很长的时间的处理，也很难被完全的透明化，从而大大限制了三维结构研究所能到达的组织深度。这些很难被完全透明的组织主要包括脂肪组织，肝脏组织和肌肉组织等。这些组织的一个共同特点是它们的组织中都富含脂滴。由于这些脂滴的高度疏水性和致密性，CLARITY技术中用来去脂的方法很难将其从组织中去除。这些致密的脂滴的折射率通常高于周围的其它分子，折射率的不匹配会引起光子的散射增加，从而降低组织的透明度和光学成像的深度。

因此，本领域迫切需要一种快速、有效的用于富含脂滴组织透明化的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速有效地使富含脂滴组织透明化的处理方法和相应的试剂盒。

本发明的第一方面提供了一种用于富含脂滴组织快速完全透明化的方法，所述的方法包括以下步骤：

(i)提供一水凝胶固定处理后的富含脂滴的组织样品；

(ii)对所述的组织样品进行透明化预处理，得到预处理样品；

(iii)对所述的预处理样品进行透明化处理，得到透明化样品；和

(iv)对所述的透明化样品进行透明化后处理，得到透明化终样品。

在另一优选例中，还包括步骤：

(v)对所述的透明化终样品进行染色和封片处理，得到测试样品。

在另一优选例中，所述的富含脂滴的组织包括：肝脏组织、脂肪组织和骨骼肌组织。

在另一优选例中，所述的富含脂滴的组织为切片形式。

在另一优选例中，所述的富含脂滴的组织为厚度0.5-1mm的切片。

在另一优选例中，所述的透明化预处理为使用表面活性剂溶液清洗所述的富含脂滴的组织样品。

在另一优选例中，所述的表面活性剂选自下组：十二烷基硫酸钠(SDS)、Triton X-100、或其组合，较佳地，所述的表面活性剂为SDS。

在另一优选例中，所述的SDS浓度为4％-8％。

在另一优选例中，所述的表面活性剂清洗所述的富含脂滴的组织样品的时间为7-11天。