[发明专利]一种牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法

说明书

本发明涉及一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法。该方法为：以制备的修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材料作为表面增强拉曼基底，以加标回收率测定的方式实现牛奶中四环素残留的检测研究。制备的牛奶中四环素表面增强拉曼光谱检测方法，当四环素存在时，影响适配体在检测体系中的结构，与适配体发生特异性识别结合，从而引起不同浓度增强基底在不同浓度四环素存在下的释放，随后对检测体系进行磁性分离，将含有磁性微球‑适配体‑四环素复合物吸附至底，对含有不同浓度增强基底的上清液进行拉曼信号测定，依据不同拉曼强度的标记分子特征峰图谱，实现对牛奶中四环素残留灵敏间接检测的目的。

技术领域

本发明涉及一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法，具体以制备修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材料作为表面增强拉曼基底，结合能够与待检测目标物四环素发生特异性结合的核酸适配体，最终以加标回收率测定的方式实现牛奶中四环素残留的快速、灵敏、高效检测研究。

背景技术

四环素族四环素广泛作为畜牧业中饲料的药物添加剂,用于防治动物肠道感染和促生长。在奶牛养殖业中由于四环素的滥用和不遵从停药期规定，其可在肝肾组织富积并随乳汁分泌而排泄，并随食物链流入人体，其最明显的残留毒性是诱导耐药菌株的产生。为了保障消费者食品安全，欧盟等许多国家对于奶制品中四环素残留实施监控。常用的四环素残留分析方法目前主要有传统的微生物检验技术、分子生物学技术、仪器分析技术和免疫学技术。现有的这些分析方法虽各有优势，但都存在一定的局限性，或者前处理步骤复杂、时间长，或者仪器设备庞大昂贵等。因此，鉴于申请人在食品安全因子检测及拉曼光谱技术使用方面积累的良好的工作基础，本发明拟制备一种快速、灵敏、有效的检测方法，结合拉曼光谱技术实现牛奶中四环素残留的高效检测，为开创食品安全因子检测新途径提供理论基础。

目前，以优化修饰对巯基苯胺标记分子的金纳米颗粒/二氧化硅核壳复合纳米材料作为表面增强拉曼基底，结合能够与待检测目标物四环素发生特异性结合的核酸适配体对牛奶中四环素进行灵敏、有效检测仍未见报道。本发明作为一种新兴的四环素残留检测方法，从一定程度上实现了食品安全因子检测的新途径开发。

发明内容

本发明的目的是提供了一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法，其灵敏度高、可靠性强、检测速度快，实现对牛奶中四环素残留检测的目的，适用于食品安全、环境监测等技术领域。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案：制备检测方法，当四环素存在时，影响适配体在检测体系中的结构，与适配体发生特异性识别结合，从而引起不同浓度增强基底在不同浓度四环素存在下的释放，随后对检测体系进行磁性分离，将含有磁性微球-适配体-四环素复合物吸附至底，对含有不同浓度增强基底的上清液进行拉曼信号测定，依据不同拉曼强度的标记分子特征峰图谱，实现对牛奶中四环素残留灵敏间接检测的目的；该方法适用于食品安全、环境监测等技术领域。

上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法，所述的增强基底为修饰对巯基苯胺(PATP)的金包二氧化硅核壳状纳米复合材料，与常用的增强基底金纳米颗粒、银纳米颗粒、金纳米棒、银纳米棒相比，具有极强的拉曼信号增强效果，同时，标记分子对巯基苯胺PATP固定在金核及二氧化硅壳之间成功避免外界环境的干扰，提高了获取拉曼信号的稳定性及重复性。

上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法，所述的核酸适配体序列为：5’-NH₂-CGT ACG GAA TTC GCT AGC CCC CCG GCA GGC CAC GGC TTGGGT TGG TCC CAC TGC GCG TGG ATC CGA GCT CCA CGT G-NH₂-3’。

上述的一种基于适配体的牛奶中四环素残留表面增强拉曼光谱检测方法，所述的核酸适配体及四环素的特异性结合能力利用圆二色谱(CD)进行表征。